[發明專利]一種基于反SELEX法的原發性肝癌體外診斷試劑

在審

• 申請號: 202010718794.0
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN112011535A
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 洪峰
• 申請（專利權）人: 湖北吉登豐生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;G01N33/53;G01N33/574
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于反SELEX法的原發性肝癌體外診斷試劑，包括由下列獨立包裝的組分組成：肝癌核酸適配子溶液；聚丙烯酰胺凝膠母液；過硫酸銨；四甲基二乙胺；甘油溶液I；甘油溶液II；氯化鈉溶液；GelRed染料溶液；陽性對照血清；陰性對照血清。

2.根據權利要求1所述的一種基于反SELEX法的原發性肝癌體外診斷試劑的篩選方法，基本步驟如下：

(1)、設計并合成隨機單鏈寡核苷酸文庫；將文庫與靶標共孵育，使文庫中能與靶標特異性結合的寡核苷酸與靶標形成復合物；

(2)、分離復合物并洗脫寡核苷酸，以洗脫的寡核苷酸為模板進行PCR擴增，制備成新的單鏈隨機寡核苷酸文庫；

(3)、開始下一輪篩選；重復數輪孵育-分離-擴增，與靶標高特異性和高親和力結合的核酸序列將留在文庫中并被指數富集；對最后一輪篩選后制備的文庫進行克隆、測序，長度及兩端序列與文庫相符的單鏈寡核苷酸序列即為核酸適配子；

(4)、測定各核酸適配子與靶標結合的特異性和親和力，選出能高特異性和高親和力結合靶標者，即可應用于靶標的檢測分析。

3.根據權利要求2所述的一種基于反SELEX法的原發性肝癌體外診斷試劑的篩選方法，其特征在于：所述PCR擴增時的工藝條件為:94℃、3-4min,95℃、31-33sec,62℃、31-33sec,72℃、31-33sec,經合適循環輪數,72℃、3min。

4.權利要求1所述的一種基于反SELEX法的原發性肝癌體外診斷試劑，其特征在于：所述陽性對照血清為3-5份；陰性對照血清為3-5份。

5.權利要求1所述的一種基于反SELEX法的原發性肝癌體外診斷試劑，其特征在于：所述甘油溶液I的濃度為50％-55％，所述甘油溶液II的濃度為60％-65％。