[發明專利]一種干細胞由Primed態向*態轉化的方法在審
| 申請號： | 202010718508.0 | 申請日： | 2020-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN111718893A | 公開（公告）日： | 2020-09-29 |
| 發明（設計）人： | 尹杰 | 申請（專利權）人： | 重慶生命知源科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/074 | 分類號： | C12N5/074 |
| 代理公司： | 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308 | 代理人： | 黎昌莉 |
| 地址： | 404600 重慶市渝*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 干細胞 primed 轉化 方法 | ||
1.一種Primed態干細胞向態干細胞轉化的主藥組合物，其特征在于，所述主藥組合物由N2補充劑、B2補充劑、β-氫硫基乙醇、達沙替尼、AZD5438、SB590885、PD0325901、Y-27632、IL6/sIL-6R、重組人激活素-A組成。
2.一種由權利要求1中所述的主藥組合物組成的制劑組合物，其特征在于，所述制劑組合物還包括F12 DMEM培養基、Neurobasal培養基、L-谷氨酰胺、非必要氨基酸、檸檬酸鈉、牛血清白蛋白、基本成纖維細胞生長因子。
3.根據權利要求2所述的制劑組合物，其特征在于，β-氫硫基乙醇與達沙替尼的摩爾比為1000：1。
4.根據權利要求2所述的制劑組合物，其特征在于，所述達沙替尼、AZD5438、SB590885、PD0325901和Y-27632的摩爾比為1：1：1：10：100。
5.根據權利要求2所述的制劑組合物，其特征在于，所述IL6/sIL-6R、重組人激活素-A和基本成纖維細胞生長因子的摩爾比為5：5：2。
6.一種干細胞由Primed態向態轉化的方法，其特征在于，具體步驟如下：
(1)將Primed態干細胞加入權利要求2所述的制劑組合物里以一定的培養時間進行培養；
(2)用胰蛋白酶溶液在30×稀釋的Matrigel膠包被或者鋪滿feeder的培養皿中將步驟(1)中培養的細胞傳代為單個細胞；
(3)用1×PBS清洗步驟(2)中得到的單個細胞，并用胰蛋白酶分離細胞至細胞培養基中以一定孵育條件進行孵育；
(4)步驟(3)中孵育得到的細胞以高比例1：2接種在涂覆的板上，移至缺氧環境進行后續傳代培養，通過檢測相關基因表達情況，篩選得到態干細胞。
7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(3)中所述孵育條件為溫度37℃下孵育1-2分鐘。
8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(4)中所述缺氧環境為5％O2，5％CO2。
9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟(4)中所述相關基因包括KLF4、KLF5、DPPA3、DPPA5、DNMT3L、NANOG。
10.權利要求1所述的主藥組合物在制備Primed態干細胞向態干細胞轉化的培養基中的運用。
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