[發(fā)明專利]一種用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的系統(tǒng)及其使用方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010717954.X | 申請日： | 2020-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN111778359B | 公開（公告）日： | 2023-06-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳旭 | 申請（專利權(quán)）人： | 貴州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 重慶強(qiáng)大凱創(chuàng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 王照偉;劉永來 |
| 地址： | 550000 貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 檢測 新型 冠狀病毒 sars cov 系統(tǒng) 及其 使用方法 | ||
1.一種用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的系統(tǒng)，其特征在于：包括mRT-LAMP單元，所述mRT-LAMP單元包括第一引物組合和第二引物組合，用于同時對
第一引物組合包括第一外引物對、第一內(nèi)引物對和第一介環(huán)引物對；
第一外引物對中的正向引物的序列為：5?-CACCTTATGGGTTGGGAT-3?；
第一外引物對中的反向引物的序列為：5?-AACATATAGTGAACCGCCA-3?；
第一內(nèi)引物對中的正向引物的序列為：
5?-GCAAGAACAAGTGAGGCCATAATCCTAAATGTGATAGAGCCA-3?；
第一內(nèi)引物對中的反向引物的序列為：
5?-ACATACAACGTGTTGTAGCTTGTCCACATGACCATTTCACTCAA-3?；
第一介環(huán)引物對中的正向引物的序列為：5?-ATTCTAAGCATGTTAGGCA-3?；
第一介環(huán)引物對中的反向引物的序列為：5?-ATTAGCTAATGAGTGTGCTCAAGT-3?；
第二引物組合包括第二外引物對、第二內(nèi)引物對和第二介環(huán)引物對；
第二外引物對中的正向引物的序列為：5?-TGGCTACTACCGAAGAGCT-3?；
第二外引物對中的反向引物的序列為：5?-TGCAGCATTGTTAGCAGGAT-3?；
第二內(nèi)引物對中的正向引物的序列為：
5?-TCTGGCCCAGTTCCTAGGTAGTCCAGACGAATTCGTGGTGG-3?；
第二內(nèi)引物對中的反向引物的序列為：
5?-AGACGGCATCATATGGGTTGCACGGGTGCCAATGTGATCT-3?；
第二介環(huán)引物對中的正向引物的序列為：
5?-AAATACCATCTTGGACTGAGATC-3?；
第二介環(huán)引物對中的反向引物的序列為：5?-AGGGAGCCTTGAATACACCAA-3?；
其中，第一介環(huán)引物對中的正向引物以及第二介環(huán)引物對中的正向引物的5’端均修飾有第一標(biāo)記分子；第一內(nèi)引物對中的正向引物的5’端修飾有第二標(biāo)記分子；第二內(nèi)引物對中的正向引物的5’端修飾有第三標(biāo)記分子；第一標(biāo)記分子為生物素；第二標(biāo)記分子為羧基熒光素；第三標(biāo)記分子為地高辛；
所述mRT-LAMP單元用于獲取mRT-LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物；所述系統(tǒng)還包括檢測單元，所述檢測單元用于定性檢測mRT-LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物中的
所述檢測單元包括高分子納米側(cè)向流生物傳感器，高分子納米側(cè)向流生物傳感器包括依次固定在背板上的樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，硝酸纖維素膜上設(shè)置有用于檢測
mRT-LAMP單元還包括鏈移位型聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶；所述mRT-LAMP單元的工作溫度為63oC；所述mRT-LAMP單元的工作時長為30min；系統(tǒng)的檢測下限為10?copies/μL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于檢測新型冠狀病毒SARS-CoV-2的系統(tǒng)的非診斷目的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）從待檢測樣品中獲取總RNA，獲得RNA模板；
（2）將RNA模板加入mRT-LAMP單元中，然后在63oC的條件下孵育30-60min，獲得mRT-LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物；
（3）使用高分子納米側(cè)向流生物傳感器檢測mRT-LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物；當(dāng)?shù)谝粰z測線、第二檢測線和質(zhì)控線同時顯色時，判定為SARS-CoV-2陽性。
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