[發明專利]一種卡利普多人工抗原及其多抗和應用

有效

• 申請號: 202010717800.0
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN112142838B
• 公開（公告）日: 2021-11-16
• 發明（設計）人: 謝清;吳銀飛
• 申請（專利權）人: 杭州傲銳生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/107;C07K1/02;C07K16/44;C07K16/06;C07K1/22;C07K1/36;C07K1/34;G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 朱亞冠

本發明公開一種卡利普多人工抗原及其多抗和應用。一種卡利普多人工抗原KAL?BSA，其特征在于對卡利普多進行化學修飾，偶聯BSA獲得能誘導B細胞的增殖和分化繼而產生特異性抗體的人工抗原?？箍ɡ斩喽嗫寺】贵w，通過采集免疫卡利普多人工抗原KAL?BSA的動物血清，再通過兩步親和層析法獲得。修飾偶聯后的KAL?BSA免疫抗原特異性好，能刺激動物產生大量抗卡利普多多克隆抗體，而非其他不需要的抗體，為后續純化提供便利?？箍ɡ斩喽嗫寺】贵w通過BSA親和柱和BGG親和柱的純化，在不大幅降低抗體效價靈敏度的情況下，進一步提升靈敏度(檢測限可達100ng/ml)，提高純度。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種卡利普多人工抗原及其多抗和應用。

背景技術

卡利普多(Carisoprodol)是一種肌肉松弛劑類藥物，主要用于治療慢性背痛?？ɡ斩嗍且环N臨床處方藥。在人體中卡利普多由CYP2C19酶通過N-脫烷基作用(N-dealkylation)轉化為其活性代謝物氨甲丙二酯(眠爾通,安寧，meprobamate)?？ɡ斩啻x為其活性代謝物氨甲丙二酯的速度與CYP2C19酶多態性有關。CYP2C19基因多態性能影響卡利普多的藥代動力學。

卡利普多的分子式：C₁₂H₂₄N₂O₄，分子量：260.33，CAS RN 78-44-4,其分子結構如式(I)：

式(I)

目前對卡利普多濫用的報道較為少見，但仍需引起注意，尤其是對那些有物質依賴傾向的患者。盡管卡利普多在治療背痛和活化患者方面被證明很有效，但其被濫用的潛力和其過量服用的毒副作用卻也招致很多批評?？ɡ斩喑Ｒ姷母弊饔冒^暈、嗜睡、惡心和心理損傷。

目前市面上沒有可用于檢測卡利普多的快速診斷試紙，也沒有可用的卡利普多免疫抗原以及高效價，特異性強的抗卡利普多多克隆抗體。

發明內容

本發明的第一個目的是針對現有技術的不足，提供一種卡利普多人工抗原。

卡利普多本身分子量太小，不具有免疫原，即缺乏T細胞表位而無法誘導動物機體產生特異性抗體，因此本發明對卡利普多進行修飾，偶聯BSA(牛血清白蛋白)，獲得能誘導B細胞的增殖和分化，繼而產生特異性抗體的人工抗原。

卡利普多人工抗原KAL-BSA的合成方法，具體如下：

步驟(1)、碳化二亞胺EDC交聯劑平衡到室溫；

步驟(2)、將BSA(牛血清白蛋白)加入到偶聯緩沖液，得到載有BSA的偶聯緩沖液；其中偶聯緩沖液為0.1M MES，其pH值為4.8-5.0；

步驟(3)、將卡利普多半抗原溶解到載有BSA的偶聯緩沖液，用以導入載體蛋白BSA；

步驟(4)、將EDC加入到上述卡利普半抗原和BSA混合的偶聯緩沖液中；

步驟(5)、室溫反應2小時，用脫鹽柱純化偶聯蛋白，獲得KAL-BSA；

步驟(6)、無菌過濾后-20℃保存。

本發明的第二個目的是提供高效價、特異性強的抗卡利普多多克隆抗體。KAL-BSA免疫新西蘭大耳兔過程中，不僅產生了抗卡利普多多克隆抗體，也會產生抗BSA抗體及其他雜蛋白，影響最終抗體的特異性和純度。

本發明采用創新的兩步親和層析法，可在不大影響抗卡利普多多克隆抗體效價，靈敏度同時進一步提升其特異性及純度，使其能更好的應用于檢測卡利普多膠體金免疫診斷試紙條。

抗卡利普多多克隆抗體的制備方法如下：