[發(fā)明專利]一種基于磁珠法的普適于多種樣本快速提取基因組DNA的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010715683.4 | 申請日： | 2020-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN111778240A | 公開（公告）日： | 2020-10-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 馬玉昆;冉函;劉艷;賈寒;張曉偉;孫瓊琳;韓仕偉;李峰峰 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京果殼生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 何葉喧 |
| 地址： | 102206 北京市昌平區(qū)*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基于 磁珠法 適于 多種 樣本 快速 提取 基因組 dna 方法 | ||
1.一種提取基因組DNA的方法，依次包括如下步驟：
(1)加入20μlProteinaseK溶液、350μl樣本液和300μlBuffer CWL，85℃、3000rpm振蕩反應(yīng)12min，然后3000rpm振蕩反應(yīng)3min；
(2)完成步驟(1)后，加入310μl磁珠異丙醇混合物，3000rpm振蕩反應(yīng)7min，然后磁吸60s；
(3)完成步驟(2)后，收集磁珠，加入750μl Buffer KL，3000rpm振蕩反應(yīng)2min，然后磁吸30s；
(4)完成步驟(3)后，收集磁珠，加入750μl Buffer CW1，3000rpm振蕩反應(yīng)2min，然后磁吸30s；
(5)完成步驟(4)后，收集磁珠，加入750μl Buffer GW2，3000rpm振蕩反應(yīng)2min，然后磁吸30s，然后風(fēng)干2min；
(6)完成步驟(5)后，收集磁珠，加入80μl Buffer EB，65℃、3000rpm振蕩反應(yīng)7min，然后磁吸60s，收集溶液，即為含基因組DNA的溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：ProteinaseK溶液的制備方法為：向25mgProteinase K干粉中加入1.25ml Proteinase K Storage Buffer使其完全溶解。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于：Proteinase K干粉和Proteinase K StorageBuffer為江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司的血液DNA提取試劑盒中的組分。
4.如權(quán)利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：磁珠異丙醇混合物的制備方法為：向裝有Magbeads PN的試劑瓶中加入33ml異丙醇，混勻。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：裝有Magbeads PN的試劑瓶為江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司的血液DNA提取試劑盒中的組分。
6.如權(quán)利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：Buffer KL、Buffer CW1和BufferGW2均為江蘇康為世紀(jì)生物科技有限公司的血液DNA提取試劑盒中的組分。
7.如權(quán)利要求1至6中任一所述的方法，其特征在于：Buffer CWL為康為世紀(jì)生物科技有限公司的口腔拭子DNA提取試劑盒中的組分。
8.如權(quán)利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述樣本液為口腔拭子樣本液；所述樣本液的制備方法為：取采樣后的口腔拭子DNA樣本保存管，棄除拭子頭，12000rpm離心5min，棄除部分上清液，保留底部500μl，震蕩混勻，即為樣本液。
9.如權(quán)利要求1至7中任一所述的方法，其特征在于：所述樣本液為唾液樣本液或血液樣本液。
10.如權(quán)利要求1至9中任一所述的方法，其特征在于：所述提取基因組DNA采用96通道全自動核酸提取儀CWE9600。
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