[發明專利]分離植物病原真菌的方法

在審

• 申請號: 202010713961.2
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN111690545A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 張園園;賈瑞芳;高婧;林克劍;趙君;張鍵;高書晶;徐林波;劉麟;李昊宇
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院草原研究所;內蒙古農業大學;內蒙古自治區農牧業科學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種分離植物病原真菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)用體積分數為70～75％的乙醇溶液浸沒植物樣本，然后采用外力吹打所述的乙醇溶液6～12s；將乙醇溶液處理后的植物樣本晾干，得到預處理植物樣本；

(2)將預處理植物樣本置于第一分離培養基上，在20～28℃的條件下培養2～7天；將第一分離培養基得到的菌落邊緣的菌絲轉入第二分離培養基，在20～28℃的條件下培養2～7天；

(3)將第二分離培養基培養得到的菌落采用單孢分離法或尖端純化法進行純化。

2.根據權利要求1所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述植物樣本選自發病部位周圍0.5～3mm處的健康組織或帶真菌的顆粒狀的植物種子。

3.根據權利要求2所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述發病部位為維管束組織，所述植物樣本為0.5～3mm厚的片狀維管束組織。

4.根據權利要求2所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述發病部位為非維管束組織，所述植物樣本為(2～5)mm×(2～5)mm的塊體。

5.根據權利要求1所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述第一分離培養基為含有終濃度為25～100mg/mL卡那霉素的水瓊脂培養基，所述第二分離培養基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。

6.根據權利要求1所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述單孢分離法包括如下步驟：

將第二分離培養基培養得到的菌落中的菌絲塊制成孢子懸液，每毫升孢子懸液中含有3×10³～5×10³個孢子；取40～60μL孢子懸液轉移至第一純化培養基，形成單個菌落；將單個菌落轉移至第二純化培養基中，于20～28℃培養。

7.根據權利要求6所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述第一純化培養基選自水瓊脂培養基或馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基，且所述第一純化培養基中含有終濃度為25～100mg/mL的卡那霉素；所述第二純化培養基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。

8.根據權利要求1所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述尖端純化法包括如下步驟：

將第二分離培養基培養得到菌落邊緣的帶有菌絲的培養基轉入尖端純化培養基中，在20～28℃的條件下培養，待菌落形成；

重復上述操作2～3次，每次重復均將上一次培養所得菌落邊緣的帶有菌絲的培養基轉入到另一個尖端純化培養基中在20～28℃的條件下培養，待菌落形成。

9.根據權利要求8所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述尖端純化培養基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基。

10.根據權利要求1所述的分離植物病原真菌的方法，其特征在于，所述植物樣本來自直立黃耆Astragalus adsurgens Pall.，所述病原真菌為黃萎病病原真菌。