[發(fā)明專利]具有廣譜中和活性的抗亨尼帕病毒單克隆抗體及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010713274.0
• 申請(qǐng)日: 2020-07-22
• 公開（公告）號(hào): CN113968908B
• 公開（公告）日: 2023-03-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳薇;于長明;劉渝嬌;范鵬飛;張冠英;李耀輝;李建民;遲象陽;郝勐;房婷;董韻竹;宋小紅;陳旖;劉樹玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/13;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京市眾天律師事務(wù)所 11478
• 代理人: 李新軍

本發(fā)明公開了一種具有廣譜中和活性的抗亨尼帕病毒單克隆抗體，所述抗體由猴源可變區(qū)和人源恒定區(qū)組成，所述猴源可變區(qū)輕重鏈均具有獨(dú)特的CDR區(qū)。本發(fā)明提供的抗體在抗原結(jié)合能力上顯示了優(yōu)異的廣譜性，與尼帕病毒糖蛋白G和亨德拉病毒糖蛋白G均具有良好的結(jié)合活性。所述抗體能夠有效中和尼帕和亨德拉假病毒；而且所述抗體的中和活性隨著抗體濃度的升高而增強(qiáng)，在1μg/mL的濃度下即可對(duì)尼帕和亨德拉假病毒實(shí)現(xiàn)近100％的中和。本發(fā)明還公開了所述抗亨尼帕病毒糖蛋白G的單克隆抗體在制備亨尼帕病毒病治療藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種單克隆抗體，屬于免疫學(xué)和微生物學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

尼帕病毒(Nipah virus,NiV)和亨德拉病毒(Hendra virus,HeV)同屬于副黏病毒科(Paramyxoviridae)亨尼帕病毒屬(Henipavirus)，為單股負(fù)鏈RNA病毒。NiV和HeV為人畜共患病病毒，人能通過接觸感染，會(huì)引起致命的呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)性疾病。NiV和HeV的自然宿主都是果蝠，但是它們的傳播途徑略有不同，HeV目前僅發(fā)現(xiàn)果蝠-馬-人這一傳播途徑，而NiV則可以通過果蝠-豬-人傳播，還可以直接通過蝙蝠傳人及人與人之間傳播。

HeV首次出現(xiàn)在澳大利亞布里斯班市郊亨德拉鎮(zhèn)，這次疫情開始于1994年，共有21匹馬和兩個(gè)人患病，馬被確認(rèn)為中間宿主，照顧護(hù)理或剖檢病馬、死馬的人易感。此后爆發(fā)的疫情也都發(fā)生在澳大利亞東岸，2006年在澳大利亞造成7人感染4人死亡，2011年則造成23匹馬、一只狗死亡以及60多人感染。

NiV最開始出現(xiàn)于馬來西亞，在1998年9月至1999年4月期間，馬來西亞霹靂州出現(xiàn)多名豬場飼養(yǎng)人員因重度腦炎死亡和大量豬患病死亡案例，最開始認(rèn)為是乙型腦炎病毒感染，后來發(fā)現(xiàn)這次疫情在易感人群、感染率以及感染方式上與乙型腦炎有著明顯的不同，并且許多患者曾接種過日本腦炎疫苗，研究人員認(rèn)定這是一種新型傳染性疾病。這次疫情中感染的人員和家畜均表現(xiàn)出急性呼吸系統(tǒng)綜合征，最終造成256人感染，105人死亡，116萬頭豬死亡，并蔓延至新加坡一屠宰場，導(dǎo)致11名工人感染、1人死亡。1999年10月，研究人員從一名患者腦脊髓液中分離出病毒。不久之后，從馬來西亞果蝠尿液中分離出NiV，確定了NiV的自然宿主。隨后，在印度、柬埔寨、泰國等國家都曾報(bào)道過尼帕病毒病，而近年來，尼帕病毒病多次在孟加拉國和印度發(fā)生，已造成數(shù)百人死亡，死亡率在50％～100％之間。NiV的研究主要集中于馬來西亞型(NiV Malaysia，NiV-MY)和孟加拉型(NiV Bangladesh，NiV-BD)。

亨尼帕病毒在入侵宿主細(xì)胞的過程中，通過病毒表面糖蛋白G與受體ephrin-B2/B3結(jié)合后，會(huì)引起G蛋白在受體結(jié)合區(qū)和莖狀區(qū)內(nèi)激活融合蛋白F發(fā)生構(gòu)象改變，從而激活F蛋白與細(xì)胞膜融合，最終病毒侵入細(xì)胞。NiV與HeV具有高度相似的基因序列，G蛋白和F蛋白的氨基酸序列相似性分別為83％和89％。因此，在疫苗和抗病毒類藥物研究中，G蛋白和F蛋白都是重要的研究靶標(biāo)。目前尚無疫苗可用于人體，抗體類藥物也僅有一株單克隆抗體m102.4進(jìn)入臨床實(shí)驗(yàn)。m102.4是通過重組人源Fab噬菌體展示庫篩選得到的人源單克隆抗體，能有效地中和尼帕病毒和亨德拉病毒，在雪貂和非洲綠猴的攻毒保護(hù)性實(shí)驗(yàn)中，m102.4能夠在亨尼帕病毒攻毒后有效保護(hù)動(dòng)物存活。2010年，m102.4被批準(zhǔn)作為緊急保護(hù)性藥物在兩位高暴露風(fēng)險(xiǎn)的人身上使用，結(jié)果這兩人都沒有出現(xiàn)感染癥狀。

鑒于本領(lǐng)域?qū)τ诳购嗄崤敛《局委熜钥贵w的技術(shù)需求，本發(fā)明的目的就是提供一種能夠針對(duì)獨(dú)特抗原表位的抗亨尼帕病毒糖蛋白G的單克隆抗體，進(jìn)而提供其在制備亨尼帕病毒病治療藥物中的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

基于上述目的，本發(fā)明首先提供了一種抗亨尼帕病毒糖蛋白G的特異性中和抗體，所述抗體為單克隆抗體，所述抗體重鏈可變區(qū)CDR1、CDR2和CDR3區(qū)氨基酸序列和輕鏈可變區(qū)CDR1、CDR2和CDR3區(qū)氨基酸序列分別如下述任一序列組合所示：