[發明專利]一種不同菌種對石油烴降解能力的比較方法及其應用

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• 申請號: 202010712915.0
• 申請日: 2020-07-23
• 公開（公告）號: CN111793592A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 彭芃;弓亮;袁林杰;王超北;解慶林;申泰銘
• 申請（專利權）人: 桂林理工大學
• 主分類號: C12N1/36
• 分類號: C12N1/36;C12Q1/06;G01N33/569
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種不同菌種對石油烴降解能力的比較方法，其特征在于，其步驟如下：

(1)菌種的活化培養：選取能降解石油烴的菌種，分別投入100mL滅菌的LB液體培養基中，并添加1％的原油，富集培養3-7d，制得富集培養的菌液；

(2)菌種的馴化培養：分別在以葡萄糖、十六烷、菲和石油烴混合物為單一碳源和能源的無機鹽培養基中加入1％步驟(1)制得的富集培養的菌液，36℃，120rpm，培養3-7d；

(3)菌懸液配制：取50mL步驟(2)制得的菌液于滅菌的離心管，4000轉，離心10min，棄去上清液，用滅菌的生理鹽水50mL懸浮沉淀物后再次離心，如上所述洗滌3次后，用紫外分光光度計測定菌懸液濃度；

(4)菌種生長曲線：用酶標儀連續測定菌液的OD₆₀₀，繪制菌液的生長曲線，確定不同菌種對石油烴降解能力。

2.如權利要求1所述的一種不同菌種對石油烴降解能力的比較方法，其特征在于，所述步驟(1)中的LB液體培養基的成分為胰蛋白胨：10g/L，酵母提取物：5g/L，NaCl：10g/L，pH值：7.0-7.4。

3.如權利要求1所述的一種不同菌種對石油烴降解能力的比較方法，其特征在于，所述步驟(2)中的無機鹽培養基的成分為KH₂PO₄：1.0g/L，K₂HPO₄：1.0g/L，NH₄NO₃：1.0g/L，MgSO₄·7H₂O：0.2g/L，FeCl₃：0.05g/L，CaCl₂·2H₂O：0.02g/L，pH：6.8-7.2。

4.如權利要求1所述的一種不同菌種對石油烴降解能力的比較方法，其特征在于，所述步驟(3)中的菌懸液配制，其特征在于，實驗操作均在超凈工作臺內或酒精燈附近完成，確保無空氣中的雜菌污染，洗滌所使用的生理鹽水需滅菌，移取菌懸液的注射器需滅菌，測定菌懸液濃度所使用的具塞比色皿使用前浸泡于70％的乙醇溶液中，以無菌的生理鹽水為空白參比，測定洗滌后的菌液濃度，將菌懸液的OD₆₀₀調至相一致。

5.如權利要求1所述的一種不同菌種對石油烴降解能力的比較方法，其特征在于，所述步驟(4)中菌液OD₆₀₀的測定：在超凈工作臺內，用8道移液器分別移取5μL的葡萄糖、十六烷、菲和石油烴混合物于無菌96孔板，繼續向上述96孔板中移取160μL的BH培養基、15μL的菌懸液和37.5μg/mL的2,6-DCPIP試劑20μL，將96孔板置于恒溫培養箱中培養，用酶標儀在0h，4h，8h，12h，16h，20h，24h，48h，60h和72h測OD₆₀₀，并觀察對應時刻96孔板的顏色變化。

6.如權利要求1所述的一種不同菌種對石油烴降解能力的比較方法的應用，其特征在于，該方法應用于比較不同菌種對其他含碳有機物污染物降解能力。