[發明專利]菌種的西林瓶保藏方法

在審

• 申請號: 202010712010.3
• 申請日: 2020-07-22
• 公開（公告）號: CN111808753A
• 公開（公告）日: 2020-10-23
• 發明（設計）人: 張靜
• 申請（專利權）人: 河北化工醫藥職業技術學院
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/19;C12R1/125;C12R1/145;C12R1/445;C12R1/385;C12R1/44;C12R1/725;C12R1/685
• 代理公司: 河北冀華知識產權代理有限公司 13151
• 代理人: 李瑞妍

本發明提供菌種的西林瓶保藏方法，屬于微生物工程技術領域。包括以下步驟：(1)西林瓶平面培養基準備：將配制并調好pH的固體培養基，趁熱分裝至西林瓶中，蓋膠塞、包包頭布、滅菌；(2)接種與培養：將菌種接種于西林瓶內的培養基中，封口、培養；(3)培養結果確認：培養結束觀察培養物狀態，確認菌落特征，鏡檢觀察菌體形態，確認菌體特征；(4)菌種保存：菌種放入2?8℃的環境保存。使用西林瓶代替試管作為菌種保存的容器，減少了菌種保存所用儲存空間，增加實驗室菌種保藏容量，解決菌種保藏容量不足的問題。

技術領域

本發明涉及微生物工程技術領域，具體涉及菌種的保藏方法。

背景技術

菌種保藏在微生物研究及實際應用中必不可少，尤其是在無菌控制領域，無菌控制是無菌制劑生產控制的要點，保存有代表性或指征作用的菌株對于提高驗證水平，提高無菌工藝水平，意義重大。比如：在滅菌或消毒后的物品中檢出的微生物，可將其保存，用于物品滅菌或消毒驗證的試驗菌。

隨微生物鑒定技術不斷成熟，許多企業已具備對檢出微生物進行鑒定，并保存有代表性或指征作用的菌株的能力，但由于存儲空間有限、常規菌種保存需耗費較大的人力成本，斜面培養基是固體培養基的一種形式；制作時應趁熱定量分裝于試管內，并凝固成斜面的稱為斜面培養基，用于菌種擴大轉管及菌種保藏。采用試管進行斜面保藏是非常常見的一種保藏形式，但是此種保藏形式需要占用大量的空間，每個車間和實驗室均只保留了一株代表菌株，QC只能先建立不同車間和實驗室微生物檢查潔凈區的檢出微生物菌株信息庫。要建立完善的微生物菌種庫，需要提高實驗室存儲菌種量的能力，需要降低單支菌種儲存占用空間，調整菌種儲存過程擺放方式。

發明內容

鑒于上述的分析，本發明旨在提供一種菌種的西林瓶保藏方法，減少了菌種保存所用儲存空間，增加實驗室菌種保藏容量，解決菌種保藏容量不足的問題。

本發明的目的主要是通過以下技術方案實現的：

一種菌種的西林瓶保藏方法，包括以下步驟：(1)西林瓶平面培養基準備：將配制并調好pH的固體培養基，趁熱分裝至西林瓶中，蓋膠塞、包包頭布、滅菌；(2)接種與培養：將菌種接種于西林瓶內的培養基中，封口、培養；(3)培養結果確認：培養結束觀察培養物狀態，確認菌落特征，鏡檢觀察菌體形態，確認菌體特征；(4)菌種保存：菌種放入2-8℃的環境保存。

菌種為大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、科氏葡萄球菌、白色念珠菌或黑曲霉。

當菌種為大腸埃希菌時，步驟(2)接種與培養：打開包頭布和膠塞，沾取一接種環大腸埃希菌原斜面菌種，劃線接種于7ml胰酪大豆胨瓊脂西林瓶培養管，蓋上膠塞，壓鋁蓋，同法再作2個平行，30-35℃培養18-24小時；

步驟(4)菌種保存：菌種放入2-8℃的環境保存1個月。

當菌種為生孢梭菌時，步驟(2)接種與培養：打開包頭布和膠塞，使用接種針沾取生孢梭菌原液體菌種，穿刺接種于10ml高層硫乙醇酸鹽固體培養基西林瓶培養管，蓋上膠塞，壓鋁蓋，同法作2個平行，30-35℃培養18-24小時；

步驟(4)菌種保存：菌種放入2-8℃的環境保存2個月。

當菌種為枯草芽孢桿菌，步驟(2)接種與培養：打開包頭布和膠塞，沾取一接種環枯草芽孢桿菌原斜面菌種，劃線接種于7ml胰酪大豆胨瓊脂西林瓶培養管，蓋上膠塞，壓鋁蓋，同法再作2個平行，在30-35℃培養18-24小時；

步驟(4)菌種保存：菌種放入2-8℃的環境保存2個月。

當菌種為金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌或科氏葡萄球菌時，步驟(2)接種與培養：打開包頭布和膠塞，打開包頭布和膠塞，沾取一接種環金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌或科氏葡萄球菌原斜面菌種，劃線接種于7ml胰酪大豆胨瓊脂西林瓶培養管，蓋上膠塞，壓鋁蓋，同法再作2個平行，在30-35℃培養18-24小時；