[發明專利]一種改良柑橘的sgRNA及其應用和使用方法在審
| 申請號： | 202010711527.0 | 申請日： | 2020-07-22 |
| 公開（公告）號： | CN111748555A | 公開（公告）日： | 2020-10-09 |
| 發明（設計）人： | 鄒修平;文慶利;龍俊宏;劉語諾;龍琴;何永睿;彭愛紅;陳善春 | 申請（專利權）人： | 西南大學 |
| 主分類號： | C12N15/113 | 分類號： | C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/78 |
| 代理公司： | 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 王燦 |
| 地址： | 400700*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 改良 柑橘 sgrna 及其 應用 使用方法 | ||
1.一種改良柑橘的sgRNA，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.6、SEQ ID No.7、SEQ ID No.8、SEQID No.9或SEQ ID No.10。
2.根據權利要求1所述的一種改良柑橘的sgRNA，其特征在于，所述sgRNA序列在改良柑橘時作用于柑橘CsPP2B15基因。
3.權利要求1所述的一種改良柑橘的sgRNA在改良柑橘黃龍病抗性中的應用。
4.權利要求1所述的一種改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)利用sgRNA序列構建CRISPR/Cas9編輯用表達載體；
(2)將步驟(1)構建的表達載體導入到柑橘中，篩選出轉基因植株；
(3)從步驟(2)獲得的轉基因植株中篩選出CsPP2B15突變體植株；
(4)從步驟(3)獲得的CsPP2B15突變體植株中篩選出柑橘黃龍病抗性植株。
5.根據權利要求4所述的一種改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步驟(1)中構建載體時所用的載體為pCas9-CsPP2B15sgRNA。
6.根據權利要求4所述的一種改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步驟(1)中構建載體時所用的酶為BamHI/SalI酶。
7.根據權利要求4所述的一種改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述導入的方法為根癌農桿菌介導法和電擊轉化法。
8.根據權利要求4所述的一種改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步驟(2)中所述的轉基因柑橘植株篩選方法為抗性篩選、GUS組織化學染色和PCR驗證。
9.根據權利要求4所述的一種改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步驟(3)中篩選突變體植株的方法為Sanger測序法和重測序技術。
10.根據權利要求4所述的一種改良柑橘的sgRNA的使用方法，其特征在于，所述步驟(4)中黃龍病抗性植株篩選方法為嫁接傳毒、溫室癥狀和切片觀察、定量PCR檢測。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于西南大學，未經西南大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202010711527.0/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
