[發(fā)明專利]一種檢測豬PRKAG3基因表達(dá)量的方法及其用途在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010711165.5 | 申請日： | 2020-07-22 |
| 公開（公告）號： | CN111961708A | 公開（公告）日： | 2020-11-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 許明曙;劉國良;翟德滔;渠東存 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江青蓮食品股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京國翰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696 | 代理人： | 孫超男 |
| 地址： | 314000 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 prkag3 基因 表達(dá) 方法 及其 用途 | ||
1.一種檢測豬PRKAG3基因表達(dá)量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、提取待測樣本豬細(xì)胞總RNA并進行cDNA合成；
S2、以cDNA為模板對PRKAG3基因和內(nèi)參基因進行熒光定量PCR擴增；
S3、分析PRKAG3基因的相對表達(dá)量；
所述PRKAG3基因的引物對包括上游引物PR-F：ACTTGGCAGACGACGTCTACAT；下游引物PR-R：CTGAGGTTCAAGTCATCA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR擴增的反應(yīng)體系為：含4.0-4.8mmol/L Mg2+的2×SYBR Mix 6.8-7.2μL，9.6-10.2μmol/L PRKAG3基因或內(nèi)參基因的上下游引物各0.3-0.5μL，cDNA 1.0-2.0μL，優(yōu)選cDNA 1.5μL，補充ddH2O至22μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述內(nèi)參基因包括但不限于β-actin基因。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述PRKAG3基因的相對表達(dá)量采用雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行分析。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述熒光定量PCR擴增的反應(yīng)程序為：95℃4-5min，95℃19-21s，60℃29-31s，共40個循環(huán)，72℃延伸5-6min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述PRKAG3基因的相對表達(dá)量的計算方法為：單位體積樣本中PRKAG3基因的拷貝數(shù)與β-actin基因的拷貝數(shù)的比值。
7.權(quán)利要求1-6任一項中所述的PRKAG3基因的引物對在制備PRKAG3基因檢測試劑盒中的用途。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于浙江青蓮食品股份有限公司，未經(jīng)浙江青蓮食品股份有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
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