[發(fā)明專利]一種新型鮐魚(yú)抗炎活性肽的制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010711135.4
• 申請(qǐng)日: 2020-07-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111978373A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-11-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 不公告發(fā)明人
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州鹿揚(yáng)科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K7/06
• 分類號(hào): C07K7/06;C12P21/06;C12P21/02;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/16;C07K1/36;A61K38/08;A61P29/00
• 代理公司: 北京國(guó)翰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696
• 代理人: 李笑磊

本發(fā)明公開(kāi)了一種新型鮐魚(yú)抗炎活性肽，氨基酸序列為HGTLVMR，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，通過(guò)采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶的一種或混合得到鮐魚(yú)活性肽，通過(guò)超濾分離、凝膠層析分離、RP?HPLC分離并對(duì)凝膠層析分離組分及RP?HPLC分離組分進(jìn)行抗炎測(cè)試，最終得到高活性的單一鮐魚(yú)抗炎活性肽。本發(fā)明得到的高抗炎活性的新型鮐魚(yú)抗炎活性肽氨基酸序列為HGTLVMR，對(duì)環(huán)氧化酶COX?2起抑制作用，抑制率至少達(dá)到了60％，抗炎效果好，同時(shí)，對(duì)細(xì)胞有促進(jìn)作用，細(xì)胞存活率高，細(xì)胞存活率至少達(dá)到了140％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種新型鮐魚(yú)抗炎活性肽的制備方法。

背景技術(shù)

海洋中的資源豐富，物種繁多，海洋生物物種占地球生物的80％以上，是具有生物活性的天然分子的巨大儲(chǔ)存庫(kù)，能夠?yàn)樘烊换钚晕镔|(zhì)提供豐富的物質(zhì)來(lái)源。與陸地生物相比，海洋生物具有多樣性、復(fù)雜性和特殊性，這就使得海洋天然產(chǎn)物在生長(zhǎng)和代謝過(guò)程中，產(chǎn)生不同于陸地生物的具有特殊生理功能的活性物質(zhì)。

鮐魚(yú)，鱸形科，鯖科，鮐屬。體型粗壯，是海洋中上層魚(yú)類。鮐魚(yú)產(chǎn)量高，在我國(guó)各海域均有分布，尤以黃海海域和東海海域分布最廣泛，此外，鮐魚(yú)在日本海域等也均有分布，是北太平洋重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類之一。由于天然存在于鮐魚(yú)中的活性肽含量較少，提取困難，人工合成成本高，因此，從鮐魚(yú)蛋白酶解產(chǎn)物中尋找生物活性肽成為人類利用鮐魚(yú)的重要途徑。

蛋白酶水解法是水解蛋白質(zhì)分子以制備生物活性肽的一種常用方法，酶水解法因?yàn)榫哂蟹磻?yīng)條件溫和，成本較低，安全性高等優(yōu)點(diǎn)而備受關(guān)注。酶水解法過(guò)程中需要對(duì)酶解時(shí)間、酶解溫度、pH值、液固比和加酶量等反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，酶水解法中常用的蛋白酶有木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白么和胃蛋白酶等，酶類的選擇尤為重要，不同的蛋白酶因?yàn)槊盖形稽c(diǎn)和反應(yīng)條件不同，即使酶解同一種蛋白質(zhì)分子，得到的多肽數(shù)目和序列也相差很大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種具有促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的、抑制環(huán)氧化酶COX-2的、可用于抗炎藥物中的新型鮐魚(yú)抗炎活性肽，包含氨基酸序列為HGTLVMR的鮐魚(yú)活性肽。氨基酸序列為HGTLVMR的鮐魚(yú)活性肽抑制了環(huán)氧化酶COX-2，促進(jìn)淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞生成速度加快，清除壞死細(xì)胞，同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞再生，從而增加機(jī)體對(duì)外界不同因素的抵抗能力和催生細(xì)胞增殖，促進(jìn)傷口愈合、身體康復(fù)，從而增強(qiáng)體質(zhì)、免疫能力、調(diào)節(jié)氣血的作用，有效地修復(fù)炎癥帶來(lái)的組織損傷，消除紅腫，使得炎癥患者能夠快速康復(fù)。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種高抗炎活性的、酶解效果好的新型鮐魚(yú)抗炎活性肽的制備方法。

本發(fā)明為實(shí)現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為：

一種新型鮐魚(yú)抗炎活性肽的制備方法，包括：將鮐魚(yú)進(jìn)行預(yù)處理工序得到預(yù)處理鮐魚(yú)魚(yú)糜；將預(yù)處理鮐魚(yú)魚(yú)糜進(jìn)行酶解工序得到鮐魚(yú)酶解液；將鮐魚(yú)酶解液進(jìn)行分離純化工序得到鮐魚(yú)抗炎活性肽，鮐魚(yú)抗炎活性肽包含氨基酸序列為HGTLVMR的鮐魚(yú)活性肽。

優(yōu)選地，將鮐魚(yú)去頭和內(nèi)臟，洗凈血水，攪成魚(yú)糜，于0.05-1wt％的碳酸氫鈉溶液中浸泡1-6h進(jìn)行脫脂，去除溶液得到預(yù)處理鮐魚(yú)魚(yú)糜。

優(yōu)選地，酶解工序中，將預(yù)處理鮐魚(yú)魚(yú)糜與去離子水混合，調(diào)節(jié)pH6-8，加入蛋白酶，在30-60℃的溫度下酶解2-12h，酶解完畢后煮沸滅酶5-30min，冷卻，離心，取上清液得到鮐魚(yú)酶解液；去離子水的添加量為鮐魚(yú)魚(yú)糜的5-30wt％。

更優(yōu)選地，蛋白酶的添加量為鮐魚(yú)魚(yú)糜的1-5wt％，蛋白酶可以為單一蛋白酶或混合蛋白酶，單一蛋白酶分別為：胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶和中性蛋白酶，混合蛋白酶為單一蛋白酶2-4種的混合。

更進(jìn)一步優(yōu)選地，混合蛋白酶為四種單一蛋白酶的混合，其中，胰蛋白酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15-23wt％，木瓜蛋白酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2-10wt％，風(fēng)味蛋白酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為40-48wt％，中性蛋白酶的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為35-43wt％。