[發明專利]一種螢光素酶底物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010705758.0
• 申請日: 2020-07-21
• 公開（公告）號: CN111675724B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發明（設計）人: 李敏勇;杜呂佩;陳新新
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: C07D513/04
• 分類號: C07D513/04;C07B59/00;C09K11/06;G01N21/64;G01N21/76
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.一種螢光素酶底物，所述螢光素酶底物結構式為：

其中，R取氘。

2.權利要求1所述螢光素酶底物的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，

所述d₂-cycluc的具體合成步驟為：

(1)1H-吲哚和鈀碳在氘氣條件下進行反應，得到中間體8；

(2)中間體8和乙酰氯進行反應，得到中間體9；

(3)中間體9和Fe(NO₃)₃·9H₂O進行反應，得到中間體10；

(4)中間體10和氯化銨、鋅粉進行反應，得到中間體11；

(5)中間體11和硫氰酸鉀進行反應，得到中間體12；

(6)中間體12、亞硝基叔丁酯和氯化亞銅進行反應，得到中間體13；

(7)中間體13和LiAlH₄進行反應，得到中間體14；

(8)中間體14、氰基三甲基硅烷和四丁基氟化銨進行反應，得到中間體15；

(9)中間體15、碳酸鉀和D-半胱氨酸鹽酸鹽進行反應，得到d₂-cycluc。

4.如權利要求3所述的制備方法，其特征在于，各反應步驟均在溶劑條件下進行。

5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，

所述步驟(1)中，

所述溶劑為氘代甲醇、氘代乙腈；

反應溫度為30～70℃，反應時間為50～80h；

所述1H-吲哚、鈀碳的摩爾比為10：1；

所述步驟(2)中，

所述溶劑為冰醋酸或鹽酸；

反應溫度為50～100℃，反應時間為1～3h；

所述中間體8、乙酰氯的摩爾比為1：(4-6)；

所述步驟(3)中，

所述溶劑為二氯甲烷、乙腈、甲醇或乙醇；

反應溫度為40～70℃，反應時間為1～3h；

所述中間體9、Fe(NO₃)₃·9H₂O的摩爾比為2：1；

所述步驟(4)中，

所述溶劑為二氯甲烷、乙腈或乙醇；

反應溫度為10～30℃，反應時間為1～3h；

所述中間體10、氯化銨、鋅粉的摩爾比為1：10：20；

所述步驟(5)中，

所述溶劑為二氯甲烷、乙腈、甲醇或乙醇；

反應溫度為10～30℃，反應時間為10～30h；

所述中間體11、硫氰酸鉀、液溴的摩爾比為1：3～4：1；

所述步驟(6)中，

所述溶劑為二氯甲烷、無水乙腈、甲醇或乙醇；

反應溫度為40～70℃，反應時間為1～3h；

所述中間體12、亞硝基叔丁酯、氯化亞銅的摩爾比為1：1～2：1.5；

所述步驟(7)中，

所述溶劑為四氫呋喃、二氯甲烷、DMF、甲醇或乙醇；

反應溫度為-40～-100℃，反應時間為1～2h；

所述中間體13、LiAlH₄的摩爾比為1～2：1；

所述步驟(8)中，

所述溶劑為無水乙腈、二氯甲烷、DMF、甲醇或乙醇；

反應溫度為40～100℃，反應時間為1～2h；

所述中間體14、氰基三甲基硅烷、四丁基氟化銨的摩爾比為1～2：1：2.5；

步驟(9)中，

所述溶劑甲醇、二氯甲烷與水以任意比例互溶的有機溶劑，

反應溫度為20～50℃，反應時間為1～5h；

所述中間體15、碳酸鉀、D-半胱氨酸鹽酸鹽的摩爾比為1：1～2：2.5。

6.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，

所述步驟(1)中，

所述溶劑為氘代甲醇。

7.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，

所述步驟(2)中，

所述溶劑為冰醋酸。