[發明專利]超高效液相色譜串聯質譜檢測血清中18種脂肪酸的方法

在審

• 申請號: 202010705355.6
• 申請日: 2020-07-21
• 公開（公告）號: CN111830163A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發明（設計）人: 成曉亮;李美娟
• 申請（專利權）人: 南京品生醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 黃欣

1.一種超高效液相色譜串聯質譜檢測血清中18種脂肪酸的方法，其特征在于：取預處理的血清，先利用超高效液相色譜將目標待測物與血清基質中的干擾組分進行分離，再利用質譜檢測目標物與其對應同位素內標的質荷比，使用同位素內標法定量，分別計算出18種脂肪酸的含量；

所述18種脂肪酸分別為：月桂酸、十四碳一烯酸、肉豆蔻酸、十六碳一烯酸、棕櫚酸、α-十八碳三烯酸、γ-十八碳三烯酸、十八碳二烯酸、十八碳一烯酸、硬脂酸、二十碳五烯酸、二十碳四烯酸、二十碳三烯酸、二十碳一烯酸、二十二碳六烯酸、二十二碳五烯酸-ω3、二十二碳五烯酸-ω6和二十二碳四烯酸；

上述18種脂肪酸對應的同位素內標物分別為：月桂酸-d3、棕櫚酸-d3、十八碳一烯酸-13C18、硬脂酸-d3、二十碳三烯酸-d6、二十二碳六烯酸-d5和二十碳五烯酸-d5；

所述預處理的血清采用以下方法進行制備：向待測血清樣本中加入混合內標工作液，渦旋后加入蛋白沉淀劑，再渦旋離心后取上清液，作為預處理的血清。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述超高效液相色譜的色譜條件如下：

流動相A為0.01~0.5%甲酸-水溶液，流動相B為乙腈和異丙醇的混合液，乙腈和異丙醇的體積比為1:2~5:1；

色譜柱型號：ACQUITY UPLC BEH C18；

流速為0.2~0.5 mL/min，柱溫為35~45℃，進樣體積為0.5~5 μL；

采用流動相A和流動相B為混合流動相進行梯度洗脫，梯度洗脫為：在0-2.5分鐘內，流動相A和流動相B的體積比為25:75；在2.5-4.5分鐘內，流動相A和流動相B的體積比由25:75勻速漸變至2:98；在4.5-6.5分鐘內，流動相A和流動相B的體積比為25:75。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述流動相A為0.1%甲酸-水溶液，流動相B為體積比5:1的乙腈和異丙醇混合液。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述質譜的色譜條件為：在電噴霧電離ESI模式下，采用多反應監測MRM進行負離子掃描；噴霧電壓為2.5 kV；離子源溫度為120℃；霧化氣溫度為400℃，霧化氣流速為800 L/h，錐孔氣流速為150 L/h。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述蛋白質沉淀劑為乙腈。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述混合內標工作液中月桂酸-d3、棕櫚酸-d3、十八碳一烯酸-13C18、硬脂酸-d3、二十碳三烯酸-d6、二十二碳六烯酸-d5和二十碳五烯酸-d5的濃度為月桂酸-d3 5μM、棕櫚酸-d3 50μM、十八碳一烯酸-13C18 10μM、硬脂酸-d3 20μM、二十碳三烯酸-d6 10μM、二十二碳六烯酸-d5 20μM和二十碳五烯酸-d5 30μM。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述預處理的血清采用以下方法進行制備：取50μL待測血清樣本，向其中加入20μL混合內標工作液，渦旋后加入430 μL乙腈，振蕩4~10 min后，在12000~15000 r/min，4~15℃離心4~10min，取60 μL上清液作為預處理的血清。