[發(fā)明專利]特異性結(jié)合SARS-COV-2 NP蛋白的抗體及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010703062.4
• 申請(qǐng)日: 2020-07-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111978396B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王陽(yáng);牛學(xué)峰;王春林;陳凌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇集萃醫(yī)學(xué)免疫技術(shù)研究所有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/13;C12N5/10;G01N33/577;G01N33/569;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 11021
• 代理人: 張瑩

本發(fā)明涉及特異性結(jié)合SARS?COV?2 NP蛋白的抗體及其用途。本發(fā)明提供分離的或非天然存在的SARS?CoV?2單克隆抗體，其包含(a)Kabat編號(hào)表示的與SEQ ID NOS：78中所示的重鏈CDR1、CDR2、和CDR3具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重鏈CDR1、CDR2、和CDR3，和(b)Kabat編號(hào)表示的與SEQ ID NOS：80中所示的輕鏈CDR1、CDR2、CDR3具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的輕鏈CDR1、CDR2、CDR3。本發(fā)明的抗體可作為治療COVID?19的治療劑或作為評(píng)估受試者中COVID?19感染的診斷工具。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及病毒抗體及其用途，尤其涉及SARS-CoV-2單克隆抗體及其醫(yī)學(xué)用途。

背景技術(shù)

2019年報(bào)告了嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2)引起的冠狀病毒病(coronavirus disease-19，COVID-19)。該病毒與2003年的SARS-CoV高度相關(guān)。該病毒主要影響肺部，但也會(huì)影響腎、肝、腦、胃腸道等多個(gè)器官。病毒通過(guò)呼吸道飛沫、尿液和糞便傳播。SARS-CoV-2的臨床癥狀包括發(fā)熱、咳嗽、呼吸急促，無(wú)其他病原體，胸部CT影像學(xué)檢查以雙側(cè)玻璃狀不透明為特征的肺炎。大部分COVID-19患者表現(xiàn)為輕度或中度綜合征，經(jīng)適當(dāng)?shù)呐R床護(hù)理后即可恢復(fù)，而部分COVID-19患者則迅速出現(xiàn)重癥肺炎和多器官功能衰竭。

目前，對(duì)于宿主SARS-CoV-2感染的免疫應(yīng)答機(jī)制仍沒(méi)有深刻理解。SARS-CoV-2 感染患者以及SARS-CoV患者和中東呼吸綜合征(MERS)患者普遍存在淋巴細(xì)胞減少。有研究觀察到，在嚴(yán)重的COVID-19病例中，總T細(xì)胞、CD4+和CD8+亞型T細(xì)胞的數(shù)量急劇減少，而程序性死亡配體1(PD-1)和T細(xì)胞免疫球蛋白粘蛋白3(Tim-3) 增加，表明T細(xì)胞已經(jīng)衰竭。一些研究者建議監(jiān)測(cè)淋巴細(xì)胞比例動(dòng)態(tài)，作為預(yù)測(cè) COVID-19嚴(yán)重程度的指標(biāo)。有合并癥的老年COVID-19患者發(fā)生嚴(yán)重肺炎和死亡的風(fēng)險(xiǎn)較高。老年患者T細(xì)胞和B細(xì)胞功能缺陷可能導(dǎo)致清除病毒的能力不足和長(zhǎng)期的促炎反應(yīng)。

目前尚無(wú)疫苗可用于預(yù)防COVID-19。因此，需要鑒定和生產(chǎn)對(duì)SARS-CoV-2有效的特異性結(jié)合抗體和中和抗體，以及闡明抗體所結(jié)合的靶標(biāo)和抗原決定簇。

發(fā)明內(nèi)容

本文已經(jīng)通過(guò)外周血T細(xì)胞受體和B細(xì)胞受體組庫(kù)分析揭示了COVID-19患者中動(dòng)態(tài)的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，為了解在系統(tǒng)水平上的T細(xì)胞和B細(xì)胞免疫應(yīng)答，發(fā)明人使用下一代測(cè)序來(lái)分析不同COVID-19疾病階段的患者的T細(xì)胞受體(TCR)和B細(xì)胞受體(BCR)組庫(kù)。在患者發(fā)病早期和恢復(fù)過(guò)程中的適應(yīng)性免疫應(yīng)答以全景可視化方式呈現(xiàn)。TCR組庫(kù)在嚴(yán)重疾病的早期發(fā)病時(shí)有急劇減少，但在恢復(fù)階段得到恢復(fù)。在一些實(shí)施方案中，監(jiān)測(cè)TCR組庫(kù)可以作為預(yù)測(cè)疾病進(jìn)展的指示性生物標(biāo)志物。BCR組庫(kù)具有IgM到IgG的同種型轉(zhuǎn)換和一過(guò)性的顯著的IgA擴(kuò)增。感染后發(fā)生主導(dǎo)性B細(xì)胞克隆擴(kuò)增，并伴有多樣性降低。本文的研究表明免疫組庫(kù)分析是評(píng)價(jià)宿主對(duì)新型病毒感染免疫力的有前途的方法。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)BCRs和TCRs 的NGS用于免疫組庫(kù)分析，可以對(duì)SARS-CoV-2感染后免疫應(yīng)答進(jìn)行整體觀察。在一些實(shí)施方案中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TCR組庫(kù)在重癥時(shí)急劇下降，但在恢復(fù)階段得到恢復(fù)。在一些實(shí)施方案中，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)發(fā)病后BCR組庫(kù)顯示主導(dǎo)性克隆擴(kuò)增與IgM/IgG同種型切換和短暫的IgA激增。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及能夠與一個(gè)或多個(gè)SARS-CoV-2表位結(jié)合的分離的或非天然存在的單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及一種分離的或非天然存在的單克隆抗體，其包含：輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQ ID NOS：1-17的氨基酸序列；以及重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQ ID NOS：18-26的氨基酸序列。