[發明專利]用于鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的抗原和間接ELISA檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202010700976.5
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN112125962B
• 公開（公告）日: 2022-06-14
• 發明（設計）人: 賀筍;任立松;郝成武;潘毅平;李延濤;任郭子君
• 申請（專利權）人: 天康制藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K14/30
• 分類號: C07K14/30;C12N9/48;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543
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本發明涉及疫苗領域，具體而言，提供了一種用于鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的抗原和間接ELISA檢測試劑盒。本發明提供一組用于鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的抗原，包括膜蛋白片段和亮氨酰氨基肽酶片段。發明人經過研究發現，在牛感染不同的病原(疫苗株和野毒株)后，只有膜蛋白抗體和亮氨酰氨基肽酶抗體的變化呈現一定的規律性，通過利用膜蛋白抗原和亮氨酰氨基肽酶抗原檢測牛體內膜蛋白抗體和亮氨酰氨基肽酶抗體的含量，從而可以實現牛支原體疫苗株或野毒株感染的鑒別診斷，為疫苗株使用后與野毒株的鑒別提供了新的思路和技術手段。

技術領域

本發明涉及疫苗領域，具體而言，涉及一種用于鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的抗原和間接ELISA檢測試劑盒。

背景技術

牛支原體是一種重要的致病性支原體，能夠導致牛乳腺炎、牛肺炎、關節炎、生殖道炎癥、不孕不育等疾病，牛在感染支原體后會伴隨其他病原的感染，影響牛的生產能力，嚴重危害畜牧養殖業的健康發展，目前已經成為危害養牛業的重要的病原之一。

牛支原體引起的牛支原體肺炎是以壞死性肺炎為主要特征的牛呼吸道傳染病。病牛體溫升高至42℃，精神沉郁、食欲減退、氣喘、劇烈咳嗽，有的繼發腹瀉，有的繼發關節炎、關節腫大等，嚴重者會出現死亡，一般來講，犢牛病情較重，病死率可達50％。治療牛支原體的藥物多為抗生素，但難以有效降低支原體肺炎引起的犢牛死亡率，以及支原體在牛場的擴散及污染。

疫苗是控制牛支原體感染的有效措施，目前國內在研的項目中多以弱毒疫苗為主，雖然具有良好的免疫原性，但由于其屬于活毒，很難完成牛場凈化的目標。滅活疫苗由于采用化學方法使疫苗株滅活，使用后無論從保護效果，還是從安全性來講，都是一個優先的選擇。但針對其使用后與野毒的鑒別診斷，尚無準確的方法。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的第一目的在于提供一組用于鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的抗原。

本發明的第二目的在于提供上述抗原的應用。

本發明的第三目的在于提供一種鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的間接ELISA檢測試劑盒。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

一組用于鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的抗原，所述抗原包括膜蛋白片段和亮氨酰氨基肽酶片段。

進一步地，編碼所述膜蛋白片段序列如SEQ ID NO.1所示。

進一步地，編碼所述亮氨酰氨基肽酶片段序列如SEQ ID NO.2所示。

上述抗原在制備鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的檢測試劑中的應用。

一種鑒定牛支原體疫苗株或野毒株感染的間接ELISA檢測試劑盒，包括包被有上述抗原的ELISA酶標板；

所述檢測試劑盒利用所述抗原分別對待測樣本中膜蛋白抗體和亮氨酰氨基肽酶抗體的含量進行檢測，如果膜蛋白抗體和亮氨酰氨基肽酶抗體的含量比值不小于閾值，則判斷牛支原體疫苗株感染。

進一步地，閾值為1.8。

進一步地，膜蛋白片段的包被濃度為40-60μg/ml。

進一步地，亮氨酰氨基肽酶片段的包被濃度為70-90μg/ml。

進一步地，還包括陽性對照、陰性對照、酶標二抗、稀釋液、顯色液、洗滌液、終止液中的至少一種。

進一步地，所述疫苗株為滅活疫苗；

優選地，所述待測樣本為牛血清。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：