[發明專利]一種超聲分離獲取魚類微小耳石的方法

有效

• 申請號: 202010699616.8
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111829810B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 李小燕;王高鴻;劉永定
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: G01N1/04
• 分類號: G01N1/04;G01N1/28;G01N1/34;G01N1/44
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 王敏鋒

1.一種超聲分離獲取魚類微小耳石的方法，其步驟是：

(1)魚類預處理：將對于體型或/和年齡較小的魚類不需處理，直接進入下一步的魚體超聲破碎步驟；

A、對于體型或/和魚齡較大的魚類取頭部部分；

B、體型較小的魚指體長小于2cm以內的魚；體型較大的魚指體長大于2cm小于5cm的魚；

C、魚齡較小的魚指仔、稚魚或小于1月齡的魚；魚齡較大的魚指進入性成熟前期的魚或大于1月齡小于3月齡的魚；

(2)魚體超聲破碎：將預處理后的魚類裝入平皿或圓盤，加入2-5ml蒸餾水，放入超聲波細胞破碎儀，調整超聲強度與時間，進行魚體破碎，超聲強度與時間根據魚類種類和生長周期確定，不小于10min，不大于30min，使用冰塊對樣品器具外部進行降溫，保持溫度在4℃以內，超聲破碎時程序選擇運行3s，暫停2s；

(3)耳石分離：將經過超聲破碎后的懸濁液在平面上搖動，使耳石從液體和雜質中分離并沉積到平皿或圓盤的底部，在解剖鏡下用一次性吸管吸除上部懸濁液，留下耳石與雜質；

(4)耳石清洗：加入容器1/3體積的蒸餾水，在解剖鏡下重復第3步驟3-5次，直到視野中耳石清晰，耳石周邊無明顯雜質；

(5)耳石收集與干燥：經過清洗的耳石再加入容器1/3體積的蒸餾水，洗入平皿或圓盤中，在平面上劃圈搖動，使耳石大部分聚集到解剖鏡視野的中間部分，吸去平皿或圓盤周邊多余水分，放入烘箱干燥，烘箱的干燥溫度不大于60℃，控制在溫度44－46℃干燥12小時或在室溫干燥24小時。