[發明專利]CAstV-Cap特異性多肽抗原、CAstV抗體、ELISA檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202010696824.2
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111875679B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 錢琨;趙偉;秦愛建;武宗儀;邵紅霞
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C07K16/10;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 南京縱橫知識產權代理有限公司 32224
• 代理人: 王玉

本發明公開了一種CAstV?Cap特異性多肽抗原、CAstV抗體、ELISA檢測試劑盒及其應用，屬于生物技術檢測領域。本發明利用人工合成的3種CAstV?Cap特異性偶聯多肽抗原作為包被液快速檢測CAstV抗體，有效提高多肽與目的抗體的結合效率，從而顯著提高檢測靈敏度，同時顯著降低非特異背景讀值，特異性高。本發明的CAstV抗體ELISA檢測試劑盒具有操作簡單、診斷速度快、成本低、在進行大規模檢測中經濟方便等優點，具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種CAstV-Cap特異性多肽抗原、CAstV抗體、ELISA檢測試劑盒及其應用，屬于生物技術檢測領域。

背景技術

近年來，禽類星狀病毒對家禽的影響受到了世界范圍內的廣泛關注。其中雞星狀病毒(CAstV)可單獨引起雛雞腎炎、腹瀉性腸炎及發育緩慢等癥狀，是導致雛雞腹瀉、痛風等疾病的重要病原體之一。

目前雖然有雞星狀病毒分子檢測方法，例如RT-PCR，real-time PCR方法等，但是雞星狀病毒抗體檢測方法極度匱乏，一些基層單位缺乏相應的實驗設備無法在第一時間進行診斷從而造成相應的損失。

酶聯免疫吸附實驗(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優點。

它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。在這種測定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)；②酶標記的抗原或抗體(標記物)；③酶作用的底物(顯色劑)。測量時，抗原(抗體)先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體(抗原)與酶結合成的偶聯物(標記物)，此偶聯物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯物與固相載體上的抗原(抗體)反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單，方便訊速，特異性強。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服現有技術的缺陷，提供一種CAstV-Cap特異性多肽抗原、CAstV抗體、ELISA檢測試劑盒及其應用，本發明采用CAstV-CAP多肽抗原作為包被抗原，有效提高多肽與目標抗體的結合效率，從而顯著提高可檢測靈敏度，同時顯著降低非特異背景讀值，特異性高，本發明的CAstV抗體的ELISA試劑盒具有操作簡單、診斷速度快、在進行大規模檢測中經濟方便等優點。

為解決上述技術問題，本發明提供一種CAstV-Cap特異性多肽抗原，所述CAstV-Cap特異性多肽抗原為以下三種BSA偶聯多肽抗原中的至少任意一種：

CAstV-CAP-1BSA-CYSSIEDANKDSRIYQT；

CAstV-CAP-2HAEVAIGQRFNWNVQSC-BSA；

CAstV-CAP-3PQQQMVWDTFDWDATFC-BSA。

以上三種偶聯多肽抗原為利用CAstV-CAP特異性多肽，采用體外人工合成方法取得的多肽抗原。本發明利用人工合成多肽作為抗原，以獲得靈敏度高、特異性高、操作簡單、并快速檢測CAstV抗體的ELISA檢測試劑盒。本發明利用三種多肽抗原(均進行偶聯)研制了CAstV抗體ELISA檢測試劑盒，準確地檢測CAstV病毒抗體，具有良好的特異性和較高的靈敏性。

本發明還提供一種CAstV抗體，所述CAstV抗體特異性的與上述的CAstV-Cap特異性多肽抗原結合。

本發明還提供一種CAstV抗體的檢測方法，包括以下步驟：

將上述的CAstV-Cap特異性多肽抗原包被酶標板，包被后用封閉液封閉；