[發明專利]一種人血漿中兒茶酚胺的液相色譜串聯質譜檢測方法

在審

• 申請號: 202010696209.1
• 申請日: 2020-07-20
• 公開（公告）號: CN111896643A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 趙海珠;王芳;李月杰;劉釜均;杭紅
• 申請（專利權）人: 上海藥明奧測醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/34;G01N30/86
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司 31211
• 代理人: 鄭權

1.一種人血漿中兒茶酚胺的液相色譜質譜聯用的內標定量檢測方法，包括以下步驟：

(1)溶液配置和樣本前處理：

配制一系列濃度梯度的兒茶酚胺標準溶液及一定濃度的兒茶酚胺內標溶液；

用離子交換固相萃取對添加兒茶酚胺內標溶液的血漿樣本進行前處理，得到供試品溶液；

用離子交換固相萃取對分別添加兒茶酚胺內標溶液的一系列濃度梯度的兒茶酚胺標準溶液進行前處理，得到一系列的對照品溶液；

所述兒茶酚胺包括腎上腺素、去甲腎上腺素和多巴胺；

(2)采用液質聯用檢測所述供試品溶液和對照品溶液：

色譜柱采用反相五氟苯基色譜柱；流動相包括流動相A和流動相B；流動相A為體積百分濃度0.01～1％的甲酸水溶液；流動相B為甲醇；采用梯度洗脫，采用梯度洗脫，梯度洗脫程序為：0～1.0min，流動相B體積百分比維持在0.0％～1.5％；1.0～2.5min，流動相B體積百分比由0.0％～1.5％增至5.0％～8.0％；2.5～3.0min，流動相B體積百分比由5.0％～8.0％遞增92.0％～95.0％；3.00～3.5min，流動相B體積百分比維持在92.0％～95.0％；3.5～4.0min，流動相B由92.0％～95.0％遞減至0.0％～1.5％。

質譜條件為：離子源為ESI；離子模式為正離子模式；監測模式為MRM；

(3)定量測定方法：

將所述對照品溶液以及供試品溶液按所述(2)色譜條件依次進樣，記錄色譜圖；將對照品溶液中兒茶酚胺對其內標物的峰面積的比值與兒茶酚胺濃度進行線性回歸產生標準曲線和/或擬合方程，或由質譜軟件系統自動生成標準曲線和/或擬合方程；將供試品溶液中兒茶酚胺對其內標物的峰面積的比值代入至所述標準曲線和/或擬合方程，計算得到血漿樣本中兒茶酚胺濃度，或由質譜軟件系統給出樣本中兒茶酚胺濃度。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述前處理包括上樣、淋洗、洗脫，收集的洗脫液濃縮，再加入復溶溶劑。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述前處理包括以下步驟：

1)樣品預處理：取樣本，加入乙酸銨溶液，充分混勻；

2)上樣：將預處理過的樣本上樣至離子交換固相萃取裝置，利用正壓裝置排干；

3)淋洗：用乙酸銨溶液進行淋洗，利用正壓裝置排干；

4)洗脫：用甲酸乙腈溶液分三次洗脫，收集洗脫液，混勻；

5)氮吹：將收集液全部在氮氣吹至近干；

6)復溶：加入甲酸水溶液進行復溶。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述離子交換固相萃取為弱陽離子交換反相固相萃取。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中，所述弱陽離子交換反相固相萃取吸附劑的類型為96孔板。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，流動相A中甲酸水溶液的體積百分濃度為0.01～0.5％；優選的，流動相A中甲酸水溶液的體積百分濃度為0.05～0.3％；更有選的，流動相A中甲酸水溶液的體積百分濃度為0.1～0.2％。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，色譜柱為ACQUITY UPLC HSSPFP Column,1.8μm,2.1mm X 100mm。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，液相色譜的柱溫為25.0～45.0℃；優選的，液相色譜的柱溫為30.0～40.0℃；優選的，液相色譜的柱溫為35.0～40.0℃。

9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(2)中，液相色譜的進樣量為0.5～50.0μL；優選的，液相色譜的進樣量為1.0～40.0μL；優選的，液相色譜的進樣量為5.0～30.0μL。