[發明專利]降解水體有機磷農藥殘留的復合物及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010694392.1
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN111849812A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 劉立明;李海兵;韋嵩
• 申請（專利權）人: 眾合發（北京）生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12N1/36;C02F3/34;C02F101/30;C12R1/10;C12R1/07
• 代理公司: 北京中創云知識產權代理事務所(普通合伙) 11837
• 代理人: 徐輝

1.一種降解水體有機磷農藥殘留的復合物，其特征為：按總重量份100份計，所述復合物中包含：10-15重量份氨基多糖螯合鹽、10-30重量份膨潤土、5-20重量份檸檬酸、25-40重量份地衣芽孢桿菌、10-25重量份短小芽孢桿菌和10-20重量份側孢芽孢桿菌。

2.根據權利要求1所述的降解水體有機磷農藥殘留的復合物，其特征為：所述氨基多糖螯合鹽是由1000-3000個乙酰葡萄糖胺殘基通過β(1→4)糖甙鏈相互連接而成的聚合物，脫乙酰度≥80％。

3.根據權利要求1所述的降解水體有機磷農藥殘留的復合物，其特征為：所述地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和側孢芽孢桿菌各自獨立地分離篩選自受農藥污染的水體。

4.根據權利要求1所述的降解水體有機磷農藥殘留的復合物，其特征為：所述農藥是指毒死蜱。

5.一種如權利要求1-4中任一項所述降解水體有機磷農藥殘留的復合物的制備方法，其特征為：包括如下步驟：

步驟1：選取按總重量份100份計，所述復合物中包含：10-15重量份氨基多糖螯合鹽、10-30重量份膨潤土、5-20重量份檸檬酸、25-40重量份地衣芽孢桿菌、10-25重量份短小芽孢桿菌和10-20重量份側孢芽孢桿菌；

步驟2：所述地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和側孢芽孢桿菌各自獨立地分離篩選自受農藥污染的水體；

步驟3：將所述氨基多糖螯合鹽、膨潤土、檸檬酸、地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌和側孢芽孢桿菌混合均勻，得所述復合物。

6.根據權利要求5所述的一種降解水體有機磷農藥殘留的復合物的制備方法，其特征為：所述步驟2中包括分離篩選的方法進一步包括如下步驟：

步驟(1)：采集水樣和沉積物，將水樣和沉積物樣品過濾；

步驟(2)：用含毒死蜱25mg/L的富集培養基于30℃，200rpm富集培養7天后，取10％轉接至新鮮富集培養液中并將農藥濃度提高一倍，再繼續培養7天，如此連續轉接6次，直至富集培養基中農藥濃度提高到600mg/L；

步驟(3)：富集培養結束后，各取10％離心收集菌體，再分別轉接到無機鹽培養基，添加600mg/L的毒死蜱，相同培養條件下再分別馴化兩周；

步驟(4)：在以毒死蜱為唯一碳源的無機鹽培養基內連續繼代培養篩選，再用平板稀釋法將馴化后的菌液涂布到含有毒死蜱100mg/L的無機鹽培養基平板，在降解菌篩選初期，利用菌株降解毒死蜱后在固體培養基平板上形成透明圈的大小進行降解能力的初步確定；

步驟(5)：挑取在平板上產生降解透明圈的單菌落進行劃線，直至分離獲得純化的菌株；選擇在含農藥培養基上生長好、傳代穩定且降解能力較好的菌株保存；根據細菌的菌落形態、生理生化特征對分離的菌株進行鑒定，從細菌的菌落形態和生理生化實驗確定優勢菌種為地衣芽孢桿菌、短小芽孢桿菌、側孢芽孢桿菌。

7.根據權利要求6所述的降解水體有機磷農藥殘留的復合物的制備方法，其特征為：所述富集培養基為：蛋白胨10.0g/L，NaCl 1.0g/L，KH₂PO₄ 1.0g/L，pH 7.0。

8.根據權利要求6所述的降解水體有機磷農藥殘留的復合物的制備方法，其特征為：所述無機鹽培養基：K₂HPO₄ 0.2g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.4g/L，FeSO₄·7H₂O0.002g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.2g/L，CaSO₄ 0.08g/L。