[發明專利]一種甜瓜枯萎病病菌的分離方法

在審

• 申請號: 202010693492.2
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN111647515A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 楊惠棟;朱方紅;曹娜;李國權;張煥欣
• 申請（專利權）人: 江西省農業科學院園藝研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12R1/77
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.一種甜瓜枯萎病病菌的分離方法，其特征在于，所述方法包括：收集田間發病的甜瓜枯萎病發病的新鮮植株，取植株葉片；分離獲得所述植株葉片的葉脈維管束，清洗干燥后將葉脈維管束置于固體培養基中培養；待長出菌絲后挑取菌絲至固體培養基中后，再倒入一層尚未凝固的固體培養基進行培養，分離得到病原菌。

2.如權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述植株葉片整體葉片無明顯變化，但葉片的葉脈出現褪綠、明化和/或黃化現象。

3.如權利要求1所述的分離方法，其特征在于，分離獲得所述植株葉片的葉脈維管束具體方法為：

去除植株葉片除葉柄之外的組織，切取獲得葉柄基部的葉脈維管束。

4.如權利要求3所述的分離方法，其特征在于，葉脈維管束切取長度為2-4cm。

5.如權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述清洗干燥具體方法為：采用無菌水沖洗2～3次后，使用無菌吸水紙吸干表面水分。

6.如權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述“待長出菌絲后挑取菌絲至固體培養基”的步驟中，挑取菌絲為真菌菌落邊緣白色菌絲。

7.如權利要求1所述的分離方法，其特征在于，所述“再倒入一層尚未凝固的固體培養基進行培養”步驟中，所述固體培養基為PDA培養基，控制其溫度為40～45℃。

8.如權利要求1所述的分離方法，其特征在于，控制上層固體培養基厚度為2～3mm，同時控制培養條件為：23-25℃光照8h和18-21℃黑暗16h交替培養3～5天；

優選的，所述方法還包括對上層培養基獲得的真菌菌落進行鑒定，待鑒定完成后進行保藏。

9.權利要求1-8任一項所述分離方法獲得甜瓜枯萎病病菌。

10.權利要求1-8任一項所述分離方法和/或權利要求9所述的甜瓜枯萎病病菌在防治甜瓜枯萎病中的應用。