[發(fā)明專利]一種氣單胞菌屬內(nèi)不同物種的條形碼鑒定引物、鑒定方法和試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010692281.7 | 申請日： | 2020-07-17 |
| 公開（公告）號： | CN111926094B | 公開（公告）日： | 2022-07-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李梅;許承佳;李丹;林森馨;陳發(fā)明;李天宇;楊呈勇;劉貽堯;吳國鋒;潘育方 | 申請（專利權(quán)）人： | 電子科技大學中山學院;中山市動物疫病預(yù)防控制中心（中山市動物衛(wèi)生技術(shù)中心） |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001 | 代理人： | 劉明星 |
| 地址： | 528402 *** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 氣單胞菌屬內(nèi) 不同 物種 條形碼 鑒定 引物 方法 試劑盒 | ||
1.一種氣單胞菌屬不同物種的條形碼鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：
A、提取待測氣單胞菌基因組DNA；
B、使用條形碼鑒定引物進行PCR擴增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測合格后進行測序；
C、將待測PCR產(chǎn)物序列作BLAST比對分析，以序列覆蓋度大于98%且相似度大于98.8%作為篩選標準，GenBank數(shù)據(jù)庫中滿足此條件的物種與待測物種為同一物種；
所述的條形碼鑒定引物為：F：5’-GGAATTCGCAACCGTTCTGGCTCAGGCTATCGT-3’；R：5’-TGTCGACGACGGCAGCCACTTTCAC-3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的條形碼鑒定方法，其特征在于，從GenBank上下載氣單胞菌屬代表種的cpn60序列，與待測序列一起構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，聚為同一最小分支具有最高的同源性。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的條形碼鑒定方法，其特征在于，所述的進行PCR擴增是：50μl的PCR反應(yīng)體系，體系成分為：ddH2O 40μl、10×PCR Buffer 5μl、10mM的dNTPs 1μl、10μM的引物-F 1μl、10μM的引物-R 1μl、DNA模板1μl、2U/μl 的Taq DNA聚合酶1μl；PCR擴增條件為：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s、退火溫度49℃，退火時間為30s、72℃延伸1min、共30個循環(huán)；72℃再延伸10min。
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