[發(fā)明專利]檢測(cè)血液中霉酚酸含量的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010692198.X
• 申請(qǐng)日: 2020-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111679023A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-09-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 翟瑞雪;賈永娟;倪君君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京和合醫(yī)學(xué)診斷技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 濟(jì)南信達(dá)專利事務(wù)所有限公司 37100
• 代理人: 李世喆

1.檢測(cè)血液中霉酚酸含量的方法，其特征在于，包括：

利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，在一定檢測(cè)條件下，分別檢測(cè)至少三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，得到各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖，其中，任一標(biāo)準(zhǔn)溶液中均含有濃度已知的霉酚酸標(biāo)準(zhǔn)品及內(nèi)標(biāo)物，不同標(biāo)準(zhǔn)溶液中霉酚酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度不同；

根據(jù)各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖，擬合得到霉酚酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

將一定量的內(nèi)標(biāo)工作液添加到一定量的血液樣本中，并進(jìn)行樣本前處理以得到待測(cè)樣本，其中，內(nèi)標(biāo)工作液中含有濃度已知的內(nèi)標(biāo)物；

利用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，在相同檢測(cè)條件下檢測(cè)待測(cè)樣本，得到待測(cè)樣本的色譜圖；

根據(jù)待測(cè)樣本的色譜圖和霉酚酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算血液樣本中霉酚酸的含量；

其中，所述檢測(cè)條件中的液相條件包括：Waters XBridge C18色譜柱，色譜柱的長(zhǎng)度為100mm、內(nèi)徑為2.1mm、填料粒徑為5μm，流動(dòng)相A為含5-10mmol/L乙酸銨的水溶液，流動(dòng)相B為甲醇，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的比例為70:30-80:20，分析時(shí)間為1.5-2.5min，柱溫為30-40℃，流速為0.2-0.4mL/min，進(jìn)樣量為5-20μL。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

流動(dòng)相A為含10mmol/L乙酸銨的水溶液，流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的比例為75:25，分析時(shí)間為2.0min，柱溫為35℃，流速為0.3mL/min，進(jìn)樣量為20μL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述檢測(cè)條件中的串聯(lián)質(zhì)譜條件包括：采用電噴霧電離源ESI，正離子掃描模式，選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式，干燥氣溫度為150-200℃，干燥氣流速為10-15L/min，霧化氣壓力為25-35psi，毛細(xì)管電壓為3500-4500V(+)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，

干燥氣溫度為200℃，干燥氣流速為13L/min，霧化氣壓力為30psi，毛細(xì)管電壓為4000V(+)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

所述將一定量的內(nèi)標(biāo)工作液添加到一定量的血液樣本中，并進(jìn)行樣本前處理以得到待測(cè)樣本，包括：

取一定量的內(nèi)標(biāo)工作液于離心管中，加入一定量的血液樣本并混勻，然后加入一定量的鹽酸水溶液并混勻，之后加入一定量的甲基叔丁基醚并混勻得到混合液，混合液靜置分層，取上清液并用N₂吹干，吹干后加入甲醇水溶液并混勻得到待測(cè)樣本。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，

所述將一定量的內(nèi)標(biāo)工作液添加到一定量的血液樣本中，并進(jìn)行樣本前處理以得到待測(cè)樣本，包括：

用移液槍移取5-10μL內(nèi)標(biāo)工作液于1.5mL的離心管中，然后加入100-200μL血液樣本，在轉(zhuǎn)速為1500-2000rpm下渦旋混勻1-2min后，加入含0.1-0.3％鹽酸的水溶液15-25μL，并在轉(zhuǎn)速為1500-2000rpm下渦旋混勻1-3min后，加入800-1200μL甲基叔丁基醚萃取劑，并在轉(zhuǎn)速為1500-2000rpm下渦旋混勻4-7min后，靜置0.8-1.5min待分層，得到上清液；

取上清液800-900μL放入另一支1.5mL離心管中，在常溫下用N₂緩慢吹干；

向吹干的離心管中加入含60-80％甲醇的水溶液100-200μL，并在轉(zhuǎn)速為1500-2000rpm下渦旋混勻1-3min后，得到待測(cè)樣品。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，

在所述分別檢測(cè)至少三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液之前，進(jìn)一步包括：

制備至少三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)工作液，標(biāo)準(zhǔn)工作液中含有濃度已知的霉酚酸標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)工作液中霉酚酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度在0.5-100μg/mL范圍內(nèi)，不同標(biāo)準(zhǔn)工作液中霉酚酸標(biāo)準(zhǔn)品的濃度不同；

利用移液器移取10μL標(biāo)準(zhǔn)工作液、10μL內(nèi)標(biāo)工作液置于離心管中，再移取加入含60-80％甲醇的水溶液180μL；

將該離心管在轉(zhuǎn)速為1500-2000rpm下渦旋混勻2-4min后，得到標(biāo)準(zhǔn)溶液。