[發(fā)明專利]一種在高水活度介質(zhì)中催化合成L-抗壞血酸油酸酯的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010691269.4
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN111733196A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姚冬生;鄭少燕;蘆根;劉大嶺;謝春芳;劉桂禎;黃炯威;勞偉明
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué);開平牽牛生化制藥有限公司
• 主分類號: C12P17/04
• 分類號: C12P17/04;C12P7/64;C12N9/20
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 劉宇峰

1.一種在高水活度介質(zhì)中催化合成L-抗壞血酸油酸酯的方法，其特征在于，包括以下步驟：以油酸乙酯和L-抗壞血酸為底物，混合后加入脂肪酶，置于高水活度的水/脂質(zhì)雙相介質(zhì)中，由重組脂肪酶催化合成L-抗壞血酸油酸酯；所述重組脂肪酶是基于Candidaparapsilosis來源的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的脂肪酶的重組脂肪酶。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的在高水活度介質(zhì)中催化合成L-抗壞血酸油酸酯的方法，其特征在于：所述水/脂質(zhì)雙相介質(zhì)的水活度a_w0.9。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述水/脂質(zhì)雙相介質(zhì)為50mM、pH6.5磷酸緩沖液和油酸乙酯乳化液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述由重組脂肪酶催化合成L-抗壞血酸油酸酯的過程是：40℃、180rpm攪拌反應(yīng)體系，反應(yīng)2.5小時后，從反應(yīng)體系中分離純化制得L-抗壞血酸油酸酯。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述分離純化方法為：每2.2mL的反應(yīng)體系加入2mL乙酸乙酯，再加入0.792g氯化鈉，渦旋混勻3min，萃取L-抗壞血酸油酸酯，然后5000rpm，離心5min。取上清，將上清液加熱至77℃揮干乙酸乙酯，得到L-抗壞血酸油酸酯。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所加入的反應(yīng)底物L(fēng)-抗壞血酸的濃度在反應(yīng)體系中的終濃度為0.2-2.2mol/L,油酸乙酯的終濃度為15-250mmol/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述重組脂肪酶是通過酵母分泌表達的重組脂肪酶。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述重組脂肪酶在反應(yīng)體系中的終濃度為0.05-2mg/mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述重組脂肪酶是通過酵母展示的重組脂肪酶。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于：所述重組脂肪酶在反應(yīng)體系中的終濃度為0.01-0.5g/mL。