[發明專利]一種多維度多價仿生識別納米界面用于胎兒細胞富集的方法

在審

• 申請號: 202010691163.4
• 申請日: 2020-07-17
• 公開（公告）號: CN111793628A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 楊朝勇;張惠敏;俞希遠
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12M1/00;B01L3/00;C12N5/09;C12N5/073
• 代理公司: 上海衡方知識產權代理有限公司 31234
• 代理人: 卞孜真

1.多維度多價樹枝狀DNA聚合物，其特征在于，其包括，

聚合物支架；

單鏈DNA、納米結構的DNA和/或PAMAM分子，其連接到所述聚合物支架上，并且能夠以聚合物支架結點向外延伸以形成多價結構；和，

核酸適配體或多肽和/或抗體，其能結合所述的單鏈DNA、納米結構的DNA和/或PAMAM樹枝狀分子，并能夠特異性結合靶向分子；

優選地，所述的多維度多價樹枝狀DNA聚合物包括，

聚合物支架；

至少一種單鏈DNA，其連接到聚合物支架；和，

至少一種核酸適配體，其通過堿基互補配對原則結合到至少一種單鏈DNA。

2.根據權利要求1所述的多維度多價樹枝狀DNA聚合物，其特征在于，所述的單鏈DNA包括第一單鏈DNA，其至少包括與所述至少一種核酸適配體部分互補的序列，以其能夠通過堿基互補配對原則結合至少一種核酸適配體；和/或，

第二單鏈DNA，其末端由生物素修飾，其用于通過生物素-鏈霉親和素結合作用將所述多維度多價樹枝狀DNA聚合物結合到微流控芯片表面或磁珠；

優選地，所述第一單鏈DNA能夠通過堿基互補配對原則結合兩種核酸適配體；優選地，所述第一單鏈DNA包括分別與所述兩種核酸適配體部分互補的序列，其中一種核酸適配體包括與另一種核酸適配體部分互補的序列，因此形成核酸適配體聚合；

優選地，所述聚合物支架為聚丙烯酰胺支架、PEG材料支架或PLGA材料支架。

3.多維度多價樹枝狀DNA聚合物，其特征在于，包括，

聚合物支架，

第一單鏈DNA和末端生物素修飾的第二單鏈DNA，其分別連接到聚合物支架，和，

至少一種核酸適配體，其結合到第一單鏈DNA。

4.根據權利要求3所述的多維度多價樹枝狀DNA聚合物，其特征在于，所述多維度多價樹枝狀DNA聚合物包括兩種核酸適配體，所述第一單鏈DNA至少部分地分別結合所述的兩種核酸適配體。

5.根據權利要求3-4任一項所述的多維度多價樹枝狀DNA聚合物，其特征在于，所述核酸適配體特異性識別和結合腫瘤細胞或胎兒細胞，優選為循環腫瘤細胞或循環胎兒細胞；優選地，所述核酸適配體特異性識別和結合胎兒細胞表面EpCAM蛋白，優選地，所述核酸適配體包括SEQ IN NO:3所示序列、結合第一單鏈DNA的序列和/或結合另外核酸適配體的序列；

優選地，所述第一單鏈DNA包括如SEQ IN NO:1所示的序列，更優選地，所述第一單鏈DNA的序列為：SEQ ID NO:2；

優選地，所述核酸適配體的序列為SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5的其中一個或兩種；

優選地，所述第一單鏈DNA通過堿基互補配對原則結合兩種核酸適配體時，所述核酸適配體的序列分別為SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5；

優選地，所述單鏈DNA和/或核酸適配體連接有熒光物質或放射性物質；

優選地，所述聚合物支架為聚丙烯酰胺支架、PEG材料支架或PLGA材料支架。

6.核酸適配體，其能夠特異性識別和結合胎兒細胞表面EpCAM蛋白，其包括SEQ IN NO:3所示序列；優選地，所述核酸適配體包括SEQ IN NO:3所示序列、和/或結合單鏈DNA的序列和/或結合另外核酸適配體的序列；優選地，所述核酸適配體的序列為SEQ ID NO:4和SEQID NO:5的其中一個或兩個。

7.核酸適配體二聚物，其能夠特異性識別和結合胎兒細胞表面EpCAM蛋白，其包括核酸適配體和單鏈DNA，所述核酸適配體其包括SEQ IN NO:3所示序列，優選地，所述核酸適配體包括SEQ IN NO:3所示序列、和/或結合單鏈DNA的序列和/或結合另外核酸適配體的序列；

更優選地，所述核酸適配體的序列為SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5的其中一個或兩個，所述單鏈DNA的序列如SEQ ID NO:7所示。