[發明專利]一種新型冠狀病毒刺突蛋白、相關生物材料及其應用、檢測試紙和檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202010680911.9
• 申請日: 2020-07-15
• 公開（公告）號: CN112079906B
• 公開（公告）日: 2022-11-04
• 發明（設計）人: 張影;熊曉犁;李寧寧;張秦魯;徐滌非;范恒新;陳明;徐朋奇;何俊;周光前
• 申請（專利權）人: 張影
• 主分類號: C07K14/165
• 分類號: C07K14/165;C12N15/50;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 王燦

本發明公開了一種高穩定性新型冠狀病毒刺突蛋白、相關生物材料及其應用、檢測試紙和檢測試劑盒，涉及生物技術和生物醫藥領域，本發明是通過對新冠病毒表面的最佳抗原刺突蛋白，即S蛋白的內部交聯改造，突破業界瓶頸，在哺乳動物中表達并純化獲得高穩定性的全長S蛋白三聚體，最大限度地保留新冠病毒表面刺突蛋白的所有抗原表位，并以此穩定S蛋白為抗原捕獲病人樣本中的新冠病毒抗體，制作準確度高，靈敏度高，穩定性高的新型冠狀病毒抗體即時檢測試劑盒。

技術領域

本發明涉及生物技術及生物醫藥領域，尤其涉及一種新型冠狀病毒刺突蛋白、相關生物材料及其應用、檢測試紙和檢測試劑盒，涉及基于內部交聯的穩定態S蛋白新型冠狀病毒抗體定量即時檢測試劑盒，具體地說是應用新冠病毒表面最佳抗原穩定態全長S蛋白、膠體金和納米磁微粒技術，實現對血液中抗新型冠狀病毒S蛋白IgM抗體和（或）IgG抗體進行即時檢測的試紙和試劑盒。

背景技術

新型冠狀肺炎（COVID-19）是由新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）感染引起的傳染病。

新型冠狀病毒傳播性強，潛伏期長，對人群普遍易感。新型冠狀肺炎患者以發熱、乏力、干咳為主要表現，嚴重者可致死。部分患者并無癥狀，隱蔽性高。由于疫情發展迅速且無特效藥和疫苗，早期診斷成為疫情防控的關鍵。

核酸檢測雖是疑似患者確診的“金標準”，但其技術壁壘高、耗時長且假陰性率高，因而核酸單項檢測不能滿足疫情期間對疑似病例快速篩查的要求。血清學特異性抗體檢測是診斷病毒感染的另一關鍵證據，該手段通過SARS-CoV-2抗原對血清中特異性抗體（IgM或者IgG）的存在及含量進行檢測，來間接判斷病毒的感染情況。抗體檢測采用靜脈血取樣，相較與核酸檢測的取樣更加穩定。目前針對SARS-CoV-2的抗體檢測主要有刺突蛋白（S蛋白）和核衣殼蛋白（N）蛋白兩種抗原，其中病毒表面的刺突蛋白（S蛋白）承擔病毒與宿主細胞膜受體結合及膜融合功能。不同冠狀病毒S蛋白彼此之間同源性低，特異性強，因此S蛋白是開發免疫診斷產品的首選抗原。然而由于S蛋白提純后穩定性較差，無法長期保存，因此目前市面上開發的免疫學檢測試劑均采用N蛋白或者S蛋白的一部分（例如受體結合區域RBD）。這些試劑無法完整的表征病毒表面的抗原特性，同時無法保證抗原蛋白在試劑盒儲備中的穩定性，存在特異性差和假陽性高等諸多問題，無法滿足大規模排查疑似病例和無癥狀患者的疫情防控要求。

針對上述問題，特提出本發明，通過中科院武漢病毒所公布的2019新型冠狀病毒基因組序列中刺突蛋白編碼序列的基礎上，在新型冠狀病毒表面S蛋白內部構建二硫鍵形式的交聯位點，移除S蛋白內部剪切位點；通過在N端插入分泌信號肽，在C段插入酶切位點、聚合信號肽以及親和純化標簽，在哺乳動物細胞中實現S蛋白三聚體的高產量分泌表達，解決產業化難題。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種新型冠狀病毒刺突蛋白、相關生物材料及其應用、檢測試紙和檢測試劑盒。

本發明的第一目的在于提供一種SARS-CoV-2高特異性抗原。

本發明的第二目的在于提供一種膠體金捕獲法檢測SARS-CoV-2抗體的檢測試紙或試劑盒。

本發明的第三目的在于提供一種膠體金間接法檢測SARS-CoV-2抗體的檢測試紙或試劑盒。

本發明的第四目的在于提供一種膠體金雙抗原夾心法檢測SARS-CoV-2抗體的檢測試紙或試劑盒。

本發明的第五目的在于提供一種納米磁微粒捕獲法檢測SARS-CoV-2抗體的檢測試紙或試劑盒。

為了達到上述目的，本發明的技術方案如下：