[發(fā)明專利]一種軟骨脫細胞基質復合支架的制備方法及其應用

有效

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• 申請日: 2020-07-15
• 公開（公告）號: CN111840642B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發(fā)明（設計）人: 王啟光;樊渝江;盧艷;梁潔
• 申請（專利權）人: 四川大學
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/24;A61L27/50;A61L27/54;A61L27/58
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 呂玲

1.一種軟骨脫細胞基質復合支架，其特征在于，結構如式Ⅰ所示，

式I

其中， 為天然高分子或其衍生物，為消化后的軟骨脫細胞基質；所述天然高分子或其衍生物所占的質量百分含量為25-75%；所述消化后的軟骨脫細胞基質的質量百分含量為25-75%；

該復合支架由脫細胞后的軟骨細胞外基質與天然高分子或其衍生物所組成；脫細胞方式為物理法、化學法或酶促法，DNA去除率大于95%，GAG保留率大于40%；

所述軟骨脫細胞基質復合支架的制備方法包括以下步驟：

1）將醫(yī)用無菌的天然高分子或其衍生物配制成濃度為10-30mg/mL的水溶液，備用；

2）制備脫細胞基質顆粒，備用；

3）將步驟2）得到的脫細胞基質顆粒加入到含胃蛋白酶的酸性溶液中，充分攪拌48h，得到乳白色液體；

4）將步驟3）得到的乳白色液體與天然高分子材料共混，成膠后進行冷凍干燥，即可制得支架。

2.如權利要求1所述的軟骨脫細胞基質復合支架，其特征在于：所述天然高分子或其衍生物為透明質酸、羧甲基殼聚糖、明膠、膠原、海藻酸鈉和硫酸軟骨素中的任意一種或幾種。

3.如權利要求1所述的軟骨脫細胞基質復合支架，其特征在于，所述軟骨細胞外基質來自兔或豬的關節(jié)軟骨，粒徑為10-50mm。

4.如權利要求1所述的軟骨脫細胞基質復合支架，其特征在于，所述脫細胞基質采用含胃蛋白酶的醋酸或鹽酸溶液進行消化，胃蛋白酶與脫細胞基質的質量比為1：5-1：10。

5.如權利要求1至4任一所述軟骨脫細胞基質復合支架，其特征在于：該軟骨脫細胞基質復合支架作為軟骨修復材料。

6.一種組織工程三維細胞支架的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

第一步：將權利要求1中制得的脫細胞基質消化液和膠原溶液滅菌后按體積比1~3:1~3混勻，預先調節(jié)pH值至5.0~6.0，然后加入細胞懸浮液混勻，調節(jié)pH值至7.0~8.0；細胞懸液的加入量為：按照5×10⁶~5×10⁷cells/mL的比例向基于天然材料膠原的天然高分子復合水凝膠混合液中加入細胞懸液；

第二步：將調節(jié)pH值后的混合溶液立即注射至生物體內的待修復部位形成水凝膠，得到組織工程三維支架；或者注入模具中，靜置成膠，而后將所得水凝膠從模具中取出并浸沒于培養(yǎng)基中，置于培養(yǎng)箱中在34~40℃、3%~5%的CO₂的條件下培養(yǎng)至少1天，得到組織工程三維細胞支架，培養(yǎng)期間定期更換培養(yǎng)基。

7.如權利要求6所述的一種組織工程三維細胞支架的制備方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基是在DMEM基礎培養(yǎng)基的基礎上加入青霉素和鏈霉素混合液、抗壞血酸以及胎牛血清得到，DMEM培養(yǎng)基中青霉素和鏈霉素混合液的濃度為0.8%~1.2%，抗壞血酸的濃度為0.15%~0.25%，胎牛血清的濃度為8%~12%。