[發明專利]一種應用天然免疫激活劑抗病毒的方法

有效

• 申請號: 202010671915.0
• 申請日: 2020-07-14
• 公開（公告）號: CN111763706B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 周翔;蔡苗苗;王柯;王晨光;蔣爭凡;張同存
• 申請（專利權）人: 武漢科技大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/0786;C12N5/09
• 代理公司: 北京中睿智恒知識產權代理事務所(普通合伙) 16025
• 代理人: 盧嬌嬌

本發明涉及一種應用小分子化合物氯喹那多抗病毒的方法，包括將有效濃度的氯喹那多應用于待處理的細胞中；本發明方法能有效激活I型干擾素信號通路，表達分泌大量的干擾素和干擾素刺激基因，從而強烈抑制病毒感染和復制，本發明方法安全、高效,使用簡便易行，應用范圍廣泛。

技術領域

本發明涉及一種應用天然免疫激活劑抗病毒的方法，特別涉及一種應用具有高效抗病毒能力的小分子化合物激活天然免疫I型干擾素信號通路的方法。

背景技術

天然免疫是機體抵御病毒感染的第一道防線。病毒的感染能夠激活天然免疫抗病毒反應。天然免疫系統中有一系列的模式識別受體(pattern?recognition?receptors,PRRs)，這些受體識別病毒來源的病原相關分子模式(pathogen-associated?molecularpatterns,PAMP)，并招募特異的接頭蛋白介導下游的信號通路，從而導致大量I型干擾素和炎癥因子的表達與分泌。I型干擾素包括單一的interferonβ(IFNβ)和interferonα(IFNα)家族蛋白。分泌的I型干擾素與位于細胞膜表面的干擾素受體結合，激活下游的JAK-STAT信號通路，啟動大量干擾素刺激基因ISGs的表達，發揮抑制病毒復制、增殖與傳播的作用。因此，I型干擾素的誘導產生在抗病毒天然免疫反應中具有關鍵的作用。

許多的刺激因素都能誘導機體產生I型干擾素，發揮抗病毒的功能。這些刺激包括：病毒感染、病毒來源的病原相關分子模式刺激、過量表達I型干擾素信號通路的關鍵蛋白質分子等等。然而，這些刺激因素均無法應用于臨床的抗病毒治療。干擾素本身盡管具有抗病毒的功能，但作為一種蛋白質，其作用受到活性和半衰期的影響，具有一定的局限性。如何找到一種既能夠激活免疫細胞產生I型干擾素，又不依賴于病毒本身的物質，與此同時還能滿足藥物活性和穩定性的要求，將能夠非常有效的應用于病毒感染的臨床治療。

發明內容

本發明的目的在于解決現有的抗病毒臨床治療藥物的不足，提供一種應用小分子化合物氯喹那多(Chlorquinaldol，C₁₀H₇C_l2NO)抗病毒的方法，所述方法應用范圍廣泛、安全性可控，強烈激活細胞中的I型干擾素信號通路，產生抗病毒天然免疫反應。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種應用小分子化合物氯喹那多抗病毒的方法，包括將有效濃度的氯喹那多應用于待處理的細胞中。

較佳的，所述氯喹那多在細胞培養基的終濃度為20μM。更佳的，用無菌的DMSO液體稀釋氯喹那多得到20mM的氯喹那多工作液，按照工作液：細胞培養液＝1：1000的比例(同時在此范圍內設置一個濃度梯度)，向細胞的培養基中加入氯喹那多工作液，使得氯喹那多在細胞培養基的終濃度為20μM(含此濃度的一個濃度梯度)，搖勻培養物，靜置于37℃培養24小時。

進一步的，所述方法包括以下具體步驟：

1、培養THP-1細胞(懸浮)并使其進入穩定的指數分裂狀態。

細胞復蘇：從液氮罐中快速取出細胞，然后在37℃水浴中快速搖動約1-2min，水面要在凍存管蓋以下，防止水進入凍存管。

轉入平板：在超凈臺中，取一平板，先加入12ml?Gibco?RPMI?1640培養液，鋪滿板底，然后把凍存管中的細胞全部吸到平板中，8字搖勻，顯微觀察狀況，然后37℃培養；

細胞換液：復蘇過夜后，觀察培養液有變黃(2-3天)，此時換液，先把細胞液全部吸入15ml離心管中，900-1000r/min離心5min，(轉速不能大于1000)，吸掉上層培養液，加入新的RPMI?1640，吹勻，全部吸到培養板中，37℃培養。