[發明專利]一種非標記型檢測前列腺特異性抗原的電化學免疫傳感器

有效

• 申請號: 202010671904.2
• 申請日: 2020-07-13
• 公開（公告）號: CN111721820B
• 公開（公告）日: 2023-05-09
• 發明（設計）人: 段學民;胥荃;盧麗敏;徐景坤;賈海燕;陳淑賢;蔣豐興
• 申請（專利權）人: 江西科技師范大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/30;G01N27/48;G01N33/574;G01N33/543
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 劉紅陽

1.一種非標記型檢測前列腺特異性抗原的電化學免疫傳感器，包括工作電極，參比電極和對電極，其特征在于，其中，所述工作電極用石墨烯氣凝膠-二硫化鉬/金納米粒子的復合材料作為修飾材料，前列腺特異性抗體作為分子識別原件；所述工作電極為玻碳電極表面依次修飾石墨烯氣凝膠-二硫化鉬/金納米粒子的復合材料、前列腺特異性抗體、牛血清蛋白；所述參比電極為飽和甘汞電極，所述對電極為鉑片電極；

所述的一種非標記型檢測前列腺特異性抗原的電化學免疫傳感器的制備方法，包括以下步驟：

(1)制備石墨烯氣凝膠-二硫化鉬復合材料/金納米粒子復合材料，即GAs-MoS₂/AuNPs復合材料；

(2)制備非標記型檢測前列腺特異性抗原的電化學免疫傳感器的工作電極；

(3)制備非標記型檢測前列腺特異性抗原的電化學免疫傳感器的工作曲線；

步驟(1)具體包括以下步驟：

①制備層狀的MoS₂

在容器中加入0.6g剝離前的MoS₂粉末，4mL正丁基鋰以及10mL超干正己烷，并在氮氣保護及攪拌條件下，80℃反應48h，待自然冷卻后，離心洗滌產物，去上清液，用正己烷洗滌3-4次，除去正丁基鋰，得到的粉末產物加水超聲1h，10000r/min離心30min后取上層的懸浮液，即為層狀MoS₂的水分散液；

②制備石墨烯氣凝膠-二硫化鉬復合材料

首先，取4mL、1mg?mL^-1上述所得的MoS₂分散液，加入16mL、2mg?mL^-1氧化石墨烯的水分散液，攪拌1h至其分散均勻，將混合液移入反應釜中，在180℃下，水熱反應12h，最后，凍干產物，得到石墨烯氣凝膠-二硫化鉬復合材料，即GAs-MoS₂；

③制備石墨烯氣凝膠-二硫化鉬/金納米粒子復合材料

將直徑為3.0mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉拋光成鏡面，分別依次在超純水、無水乙醇、超純水中超聲清洗；將10μL、1mg/mL所得的GAs-MoS₂復合材料分散液滴加到電極表面上，在空氣中自然干燥，作為工作電極；使用電化學工作站以三電極體系沉積金納米粒子，以飽和甘汞電極為參比電極，鉑片電極為對電極，在5.0mL、5mmol?L^-1的氯金酸溶液中，用時間-電流方法進行沉積，輸入電壓為-0.2V，運行時間為120s，得到石墨烯氣凝膠-二硫化鉬/金納米粒子的復合材料，即GAs-MoS₂/AuNPs復合材料；

步驟(2)具體包括以下步驟：

將6.0μL、21.994μg/mL的前列腺特異性抗體滴加到步驟(1)制得的GAs-MoS₂/AuNPs復合材料修飾的工作電極表面，在37℃水浴槽中孵育1.5小時；然后將6.0μL、0.1wt％的牛血清白蛋白溶液滴加到電極表面，在37℃水浴槽中固定0.5小時，用以封閉非特異性活性位點，用pH為7.0的磷酸鹽緩沖液沖洗電極表面，自然晾干，得到非標記型檢測前列腺特異性抗原的電化學免疫傳感器的工作電極；

步驟(3)具體包括以下步驟：

將一系列不同濃度的前列腺特異性抗原溶液滴加在步驟(2)制備的工作電極表面，在37℃水浴槽中孵育1小時，用pH為7.0的磷酸鹽緩沖液沖洗電極表面，自然晾干，使用電化學工作站以三電極體系進行測試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑片電極為對電極，在含有0.1MKCl和5mM[Fe(CN)₆]^3-/4-且pH為7.0的磷酸緩沖液中，用差分脈沖陽極伏安法測固定抗原前后的工作電極的響應電流，得到二者電流差ΔI與初始電流I的關系，即抑制率，為ΔI/I，記錄不同濃度下的抑制率與抗原濃度C_PSA，得到工作曲線，利用工作曲線法，得到待測樣品中前列腺特異性抗原的濃度。