[發(fā)明專利]一種測定血清中茚達(dá)特羅格隆溴銨濃度的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010664833.3
• 申請(qǐng)日: 2020-07-10
• 公開（公告）號(hào): CN111624292A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王玲
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢伯瑞恒醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明提供了一種測定血清中茚達(dá)特羅格隆溴銨濃度的方法，包括以下步驟：儲(chǔ)備液配制，工作液的配制，標(biāo)準(zhǔn)曲線和質(zhì)控樣本的配制，內(nèi)標(biāo)工作液的配制，茚達(dá)特羅樣品預(yù)處理；格隆溴銨樣品預(yù)處理，方法驗(yàn)證。有益效果為：本發(fā)明提出的測定血清中茚達(dá)特羅格隆溴銨濃度的方法靈敏高(茚達(dá)特羅LLOQ為20.00pg/mL，格隆溴銨LLOQ為5.000pg/mL)，對(duì)于格隆溴銨未見報(bào)道使用LC?MS/MS法進(jìn)行人血清血藥濃度檢測，且本法定量下限到5.000pg/mL，盡管已有LC?MS/MS法已將茚達(dá)特羅定量下限分別降低至到3.000pg/mL和10.00pg/mL，且本法采用蛋白沉淀法處理樣本，操作方便，方法穩(wěn)定可靠，能滿足臨床大批量樣本檢測需求。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及血漿測定技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種測定血清中茚達(dá)特羅格隆溴銨濃度的方法。

背景技術(shù)

茚達(dá)特羅是一種新型的、超長效、快速起效的β2-腎上腺素受體激動(dòng)劑，用于哮喘和慢性阻塞性肺疾病的日常治療。茚達(dá)特羅通過刺激氣道平滑肌中的β2-腎上腺素受體起作用，這導(dǎo)致肌肉松弛，增加氣道的直徑，從而在哮喘和慢性阻塞性肺病中收縮。茚達(dá)特羅在呼吸道膜中的脂質(zhì)筏域有很高的親和性，慢慢地從受體上分離，所以作用時(shí)間長。茚達(dá)特羅有很高的內(nèi)在功效，起效快。格隆溴銨是一種合成的季銨鹽結(jié)構(gòu)的長效乙酰膽堿受體拮抗劑，具有抑制胃液分泌及調(diào)節(jié)胃腸蠕動(dòng)作用，對(duì)人體乙酰膽堿能M3受體的選擇性高于M2受體4倍，可特異性結(jié)合并抑制支氣管平滑肌分布的M3型乙酰膽堿受體而擴(kuò)張氣道。

目前，藥物藥代動(dòng)力學(xué)以及生物等效性的研究均通過測定藥物的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)來評(píng)價(jià)。因此，血清中茚達(dá)特羅和格隆溴銨的濃度測定對(duì)于茚達(dá)特羅格隆溴銨藥物開發(fā)顯得極為重要，目前少有報(bào)道檢測人血清中茚達(dá)特羅和格隆溴銨的分析方法。使用茚達(dá)特羅格隆溴銨吸入粉霧劑用膠囊后茚達(dá)特羅和格隆溴銨在健康人血清中血藥濃度低[1]，茚達(dá)特羅保留弱、信號(hào)響應(yīng)差，對(duì)檢測靈敏度要求高。目前，能準(zhǔn)確測定人血漿中茚達(dá)特羅血藥濃度的定量分析方法以HPLC和LC-MS/MS法為主。格隆溴銨主要以LC-MS/MS法檢測馬尿以及臨床前藥代動(dòng)力學(xué)研究。本方法采用LC-MS/MS方法測定人血清中茚達(dá)特羅和格隆溴銨的濃度。

現(xiàn)有技術(shù)中，HPLC法和LC-MS/MS法測定人血漿中茚達(dá)特羅的濃度有報(bào)道，這些方法要么靈敏度低、分析時(shí)間長、要么用樣量多、線性范圍窄，無法滿足大批量樣本生物分析的需要；LC-MS/MS法測定人血清中格隆溴銨的濃度無報(bào)道，LC-MS/MS法由于具有特異性好和靈敏度高等諸多優(yōu)點(diǎn)，是小分子藥物生物分析的首選方法。LC-MS/MS法建立了一種簡單，快速，耐用的，靈敏度高的、選擇性好的用于測定人血清中茚達(dá)特羅和格隆溴銨血藥濃度的LC-MS/MS方法，該方法可用于茚達(dá)特羅格隆溴銨制劑生物等效性的研究。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種測定血清中茚達(dá)特羅格隆溴銨濃度的方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種測定血清中茚達(dá)特羅格隆溴銨濃度的方法，包括以下步驟：

步驟一：儲(chǔ)備液配制，分別精密稱量茚達(dá)特羅對(duì)照品2份，用甲醇溶解搖勻、配制成濃度20.00μg/mL的茚達(dá)特羅儲(chǔ)備液，即儲(chǔ)備液茚達(dá)特羅-STD-Stock，茚達(dá)特羅-QC-Stock；分別精密稱量格隆溴銨對(duì)照品2份，用甲醇溶解搖勻、配制成濃度20.00μg/mL的格隆溴銨儲(chǔ)備液，即儲(chǔ)備液格隆溴銨-STD-Stock，格隆溴銨-QC-Stock；

步驟二：工作液的配制，標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液以茚達(dá)特羅-STD-Stock和格隆溴銨-STD-Stock為起始溶液，以甲醇：水(50：50，v：v)溶液為稀釋溶劑逐級(jí)稀釋得到茚達(dá)特羅和格隆溴銨的各級(jí)標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液；質(zhì)控工作液以茚達(dá)特羅-QC-Stock和格隆溴銨-QC-Stock為起始溶液，以甲醇：水(50：50，v：v)溶液為稀釋溶劑逐級(jí)稀釋得到茚達(dá)特羅和格隆溴銨的各級(jí)質(zhì)控工作液；