[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)外泌體的DNA分子機(jī)器

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010655609.8
• 申請(qǐng)日: 2020-07-09
• 公開（公告）號(hào): CN111781180B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇高星;于艷艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南通大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6823
• 分類號(hào): C12Q1/6823
• 代理公司: 北京科家知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11427
• 代理人: 徐思波

1.一種用于檢測(cè)外泌體的DNA分子機(jī)器，其特征在于，由特征Substrate鏈和Aptamer鎖定的Motor鏈結(jié)合在金納米顆粒GNP表面構(gòu)成；

Motor鏈的特征序列為5’→3’：

GTGCTGAGGTGTAGCATTAGTGTCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-SH；

構(gòu)建DNA分子機(jī)器的具體步驟為：

S1、DNA分子機(jī)器以直徑15nm的金納米顆粒GNP為基礎(chǔ)，Substrate鏈和被CD63 aptamer鎖定的Motor鏈通過鏈一端的-SH連接到金納米顆粒GNP表面；

S2、鎖住Motor鏈：將1μL Motor和2μL CD63適體在97μL PBS中混合進(jìn)行退火；將混合物加熱至95℃并在30min內(nèi)逐漸冷卻至4℃；然后，將18μL Substrate和2μL TCEP加入混合物中渦旋混勻；于室溫下靜置20min后，將上述混合物加入1mL 金納米顆粒GNP溶液中并在室溫下緩慢攪拌12h后加入10μL吐溫20，避免金納米顆粒GNP聚集；

DNA分子運(yùn)行能量來自于限制性內(nèi)切酶Nt.BbvCI對(duì)特異性序列的切割。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)外泌體的DNA分子機(jī)器，其特征在于，Substrate鏈一端為巰基-SH，另一端為熒光素FAM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用于檢測(cè)外泌體的DNA分子機(jī)器，其特征在于，Substrate鏈特征序列為5’→3’：

FAM-CACCTCAGCACTTTTTTTTTTTTTT-SH。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)外泌體的DNA分子機(jī)器，其特征在于，金納米顆粒GNP的尺寸為13~25 nm。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的用于檢測(cè)外泌體的DNA分子機(jī)器，其特征在于，Substrate鏈和Motor鏈在金納米顆粒GNP表面的比例為5:1~50:1。