[發(fā)明專利]核固紅染色在抗雙鏈DNA檢測方法中新用途

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010651366.0
• 申請日: 2020-07-08
• 公開（公告）號: CN111751528A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李立和;李志永;齊秀會
• 申請（專利權(quán)）人: 天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/53
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• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種核固紅染色在抗雙鏈DNA檢測方法中新用途，屬于免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明的技術(shù)方案是以綠蠅短膜蟲為抗原基質(zhì)，應(yīng)用甘油核固紅染色液進(jìn)行封片染色，間接免疫熒光檢測抗dsDNA抗體，綠蠅短膜蟲體內(nèi)的細(xì)胞核細(xì)胞核呈現(xiàn)橘紅色或者黃色；與鞭毛相連接的部位即為鞭毛基體，被染成淺橘紅色或者淺黃色；體積略小于細(xì)胞核大于鞭毛基體，位置介于兩種細(xì)胞器中間的即為動基體，動基體出現(xiàn)綠色熒光即為抗dsDNA抗體陽性，本發(fā)明的技術(shù)特點(diǎn)是能夠在熒光顯微鏡下清晰辨別細(xì)胞核，動基體，鞭毛基體三種細(xì)胞器。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫分析技術(shù)領(lǐng)域；或是利用可見光，通過測試反應(yīng)的結(jié)果產(chǎn)生顏色變化來測試材料的方法，特別是應(yīng)用核固紅染色和免疫熒光檢測抗雙鏈DNA測定方法。

背景技術(shù)

實(shí)驗(yàn)室檢測抗雙鏈DNA(dsDNA)抗體的常規(guī)方法有ELISA、綠蠅短膜蟲間接免疫熒光檢測(CLIFF)和免疫印跡法(IBT)，但美國風(fēng)濕病學(xué)會(ACR)1997年修定的SLE分類診斷標(biāo)準(zhǔn)中并未對抗dsDNA抗體的檢測方法進(jìn)行限定。臨床實(shí)驗(yàn)室常采用間接免疫熒光檢測dsDNA，本方法以綠蠅短膜蟲為抗原基質(zhì)，檢測血清中抗雙鏈DNA抗體，綠蠅短膜蟲(crithidia luciliae)屬原生動物門動鞭毛蟲綱動質(zhì)目短膜蟲屬，主要寄生在節(jié)肢動物體內(nèi)，對人畜無害，它的身體大多呈橢圓形，中間有一個大的核，尾部有一根長長的鞭毛幫助身體運(yùn)動，在鞭毛基部和核之間有一個略小于核的線粒體(也稱動基體)，該動基體內(nèi)含有大量的純的dsDNA，通常不含有其它抗原，抗dsDNA抗體陽性表現(xiàn)為動基體均質(zhì)的或邊緣亮度增強(qiáng)的熒光，僅細(xì)胞核或鞭毛基體出現(xiàn)的熒光判斷為抗dsDNA抗體陰性。

核固紅，又稱鈣紅，細(xì)胞核堅(jiān)牢紅，核快紅，分子式：C₁₄H₈NNaO₇S，分子量：357.28，性狀：遇氫氧化鈉成淺紫色，在硫酸中為棕色溶液，溶于乙醇和水，最大吸收波長518nm，有刺激性，文獻(xiàn)上也有指本品為中性紅(Neutral red)的，顏色指數(shù)(Colour Index Number)60760，水中溶解度:1g/L(25℃)，密封陰涼干燥避光保存，臨床上主要用于病理學(xué)染色，在本發(fā)明用于區(qū)分綠蠅短膜蟲體內(nèi)的細(xì)胞核，動基體，鞭毛基體，而不干擾熒光測定。

目前檢測方法中存在的問題是：熒光顯微鏡下綠蠅短膜蟲體內(nèi)的細(xì)胞核，動基體，鞭毛基體很難分辨，結(jié)構(gòu)模糊，熒光特征可以出現(xiàn)三種細(xì)胞器可以同時陰性，同時陽性，或者其中的一個或兩個陽性等情況，細(xì)胞核和動基體大小基本相似，很難分辨動基體的熒光模型。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種準(zhǔn)確區(qū)分細(xì)胞核，動基體，鞭毛基體三種細(xì)胞器的核固紅染色抗dsDNA抗體熒光測定方法，該方法使綠蠅短膜蟲體內(nèi)的細(xì)胞核呈現(xiàn)橘紅色或者黃色；與鞭毛相連接的部位即為鞭毛基體，染色為淺橘紅色或者淺黃色；體積略小于細(xì)胞核大于鞭毛基體，介于兩種細(xì)胞器中間的即為動基體，動基體出現(xiàn)綠色熒光即為抗dsDNA抗體陽性。

采用的技術(shù)方案是：本方法以綠蠅短膜蟲為抗原基質(zhì)，檢測血清中抗雙鏈DNA抗體，應(yīng)用甘油核固紅染色液進(jìn)行封片染色，間接免疫熒光檢測抗dsDNA抗體，綠蠅短膜蟲體內(nèi)的細(xì)胞核細(xì)胞核呈現(xiàn)橘紅色或者淺黃色；與鞭毛相連接的部位即為鞭毛基體，染色為淺橘紅色或者淺黃色；體積略小于細(xì)胞核大于鞭毛基體，介于兩種細(xì)胞器中間的即為動基體，動基體出現(xiàn)綠色熒光即為抗dsDNA抗體陽性。

附圖說明

圖1本發(fā)明綠蠅短膜蟲體內(nèi)細(xì)胞核、動基體、鞭毛基體結(jié)構(gòu)示意圖。

圖中：1.蟲體 2.細(xì)胞核

3.動基體 4.鞭毛基體

5.鞭毛

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1