[發(fā)明專利]一種用于獲取顱頸動(dòng)脈夾層致病基因突變相關(guān)信息的DNA文庫(kù)及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010650847.X
• 申請(qǐng)日: 2020-07-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111778562A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓翔;朱珠;董強(qiáng);徐昳;王曦路;杜雪柯;嚴(yán)陳燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院;上海昂樸生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C40B40/08
• 分類號(hào): C40B40/08;C12Q1/6883;C12Q1/6869
• 代理公司: 上海華工專利事務(wù)所(普通合伙) 31104
• 代理人: 趙孟琴;繆利明

1.一種用于獲取顱頸動(dòng)脈夾層致病基因突變相關(guān)信息的DNA文庫(kù)，包括85個(gè)顱頸動(dòng)脈夾層致病基因，其特征在于，所述的85個(gè)顱頸動(dòng)脈夾層致病基因如下表所示：

2.一種如權(quán)利要求1所述的用于獲取顱頸動(dòng)脈夾層致病基因突變相關(guān)信息的DNA文庫(kù)在制備診斷試劑盒中的應(yīng)用。

3.一種如權(quán)利要求1所述的用于獲取顱頸動(dòng)脈夾層致病基因突變相關(guān)信息的DNA文庫(kù)在制備診斷裝置中的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述診斷裝置為測(cè)序芯片。

5.一種如權(quán)利要求2-4所述的用于獲取顱頸動(dòng)脈夾層致病基因突變相關(guān)信息的DNA文庫(kù)的應(yīng)用，其特征在于，包括如下步驟：

S1.提取檢測(cè)對(duì)象的基因組DNA；

S2.對(duì)提取的基因組DNA進(jìn)行定量，并構(gòu)建文庫(kù)；

S3.對(duì)文庫(kù)進(jìn)行定量操作；

S4.上機(jī)測(cè)序；

S5.數(shù)據(jù)分析得到致病位點(diǎn)相關(guān)信息。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟S2中的構(gòu)建文庫(kù)包括如下步驟：

S21.將基因組DNA進(jìn)行片段化；

S22.將片段化的基因組DNA進(jìn)行末端修復(fù)和3'末端添加堿基A；

S23.將3'末端添加堿基A的產(chǎn)物連接擴(kuò)增接頭，以進(jìn)行有效連接產(chǎn)物的富集；

S24.將連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，富集有效產(chǎn)物；

S25.使用探針對(duì)富集的模板中的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行捕獲；

S26.將捕獲的目標(biāo)片段分離；

S27.加上完整接頭獲得捕獲文庫(kù)。

7.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，S1中的基因組DNA來(lái)源于人類。

8.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，S1中的提取方法包括純化柱純化、磁珠純化或酚氯仿提取。

9.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，S24中，使用如SED IQ NO.1和SED IQ NO.2所示的引物序列進(jìn)行第一次PCR擴(kuò)增。

10.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，S5的具體操作如下：通過(guò)對(duì)所得測(cè)序數(shù)據(jù)與人類基因組的參考序列進(jìn)行對(duì)比，最終對(duì)所測(cè)基因的每個(gè)突變位點(diǎn)情況進(jìn)行分析，得到致病突變相關(guān)信息。