[發(fā)明專利]一種靶向表達(dá)癌胚抗原的細(xì)胞的嵌合抗原受體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010650683.0
• 申請日: 2020-07-08
• 公開（公告）號: CN111732665B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 董堅;孫亞如;聶紫;楊圣;李文榮
• 申請（專利權(quán)）人: 上海萊馥醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C07K16/30;C12N15/867;C12N5/10;A61P35/00
• 代理公司: 上海元好知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31323
• 代理人: 賈慧琴;周乃鑫

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向表達(dá)癌胚抗原的細(xì)胞的嵌合抗原受體，所述嵌合抗原受體包括依次連接的前導(dǎo)肽、單鏈抗體、鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域。本發(fā)明還涉及編碼所述嵌合抗原受體的核酸，表達(dá)所述嵌合抗原受體的重組表達(dá)載體、免疫細(xì)胞。本發(fā)明還涉及靶向癌胚抗原的單鏈抗體。通過將本發(fā)明的嵌合抗原受體導(dǎo)入慢病毒表達(dá)載體，然后感染免疫細(xì)胞，在免疫細(xì)胞表面可以表達(dá)靶向CEA的嵌合抗原受體，嵌合抗原受體能夠有效并且特異性地靶向表達(dá)CEA表面抗原的惡性細(xì)胞，從而為治療一些表達(dá)CEA表面抗原的腫瘤，提供更高效并且副作用和不良反應(yīng)更少的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細(xì)胞免疫治療領(lǐng)域，具體涉及一種靶向表達(dá)癌胚抗原的細(xì)胞的嵌合抗原受體。

背景技術(shù)

細(xì)胞免疫治療是一種正在興起的腫瘤治療方法，其通過分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor，CAR)的表達(dá)載體，并將該表達(dá)載體導(dǎo)入到從人體分離的免疫細(xì)胞中，使其細(xì)胞表面表達(dá)CAR后進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)，將其回輸至人體。表達(dá)CAR的免疫細(xì)胞能夠特異性識別并結(jié)合靶細(xì)胞，通過釋放特異的免疫因子對其進(jìn)行殺傷。第一代CAR-T雖然能夠介導(dǎo)對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，但是不轉(zhuǎn)導(dǎo)增殖信號和誘導(dǎo)細(xì)胞因子產(chǎn)生，并且體內(nèi)持續(xù)作用時間不長，只能引起短暫的T細(xì)胞增殖，因此，抗腫瘤效果甚微；第二代CAR-T通過增加共刺激分子(例如4-1BB或CD28)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域以延長其體內(nèi)存活時間，促進(jìn)其迅速擴(kuò)增能力，通過構(gòu)建scFv/4-1BB(或CD28)/CD3-z的CAR-T可以裂解靶細(xì)胞，傳遞活化信號，產(chǎn)生大量的IFN-γ、IL-2等細(xì)胞因子；第二代CAR-T較第一代具有更好的增強(qiáng)T細(xì)胞活化、擴(kuò)增、抗腫瘤以及促進(jìn)轉(zhuǎn)基因表達(dá)的能力。

CAR-T在殺傷腫瘤方面具有的主要優(yōu)勢是：第一，由于其抗原識別結(jié)合域能夠識別腫瘤抗原，因此針對腫瘤的特異性很高；第二，由于其胞內(nèi)信號傳導(dǎo)域可以迅速同時開啟CAR-T的殺傷和擴(kuò)增的下游信號，因此腫瘤殺傷效率高，CART細(xì)胞能夠在體內(nèi)持續(xù)擴(kuò)增；第三，由于CAR-T不需要通過TCR和MHC分子相結(jié)合的方式開啟腫瘤殺傷，因此具有非MHC限制性，可以直接識別腫瘤表面抗原，因此腫瘤的識別效率高特異性強(qiáng)，同時能夠殺傷MHC下調(diào)的腫瘤細(xì)胞。基于CAR-T的這些優(yōu)勢，CAR-T在B細(xì)胞急性白血病和非霍奇金氏淋巴瘤等血液腫瘤的治療上已取得了顯著的療效，已獲得了FDA的審批，并且在實體腫瘤的治療中已經(jīng)顯示了初步的療效。

胃腸道腫瘤對于人類生命是一個很大的威脅，雖然手術(shù)治療、放化療、介入治療等治療手段對于該類腫瘤有一定療效，但患者生存率仍無顯著改善。目前，備受關(guān)注的CAR-T細(xì)胞治療技術(shù)有望成為治療的突破口。

癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)，是一種富含多糖的胚胎抗原，CEA是一種廣譜性腫瘤標(biāo)志物，可在多種腫瘤中表達(dá)，同時可在多種腫瘤患者血清中出現(xiàn)，屬于臨床上很常用的一項腫瘤標(biāo)志物，在臨床上主要用于輔助惡性腫瘤的診斷、判斷預(yù)后、監(jiān)測療效和腫瘤復(fù)發(fā)等。開發(fā)針對CEA的CART細(xì)胞療法可能是一種有效的治療多種實體腫瘤的有效治療方法。

發(fā)明內(nèi)容

為了開發(fā)針對CEA的免疫細(xì)胞療法，本發(fā)明的目的第一方面，提供一種靶向表達(dá)癌胚抗原的細(xì)胞的嵌合抗原受體，該嵌合抗原受體包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的靶向癌胚抗原的單鏈抗體。

較佳地，所述的嵌合抗原受體包含：依次連接的前導(dǎo)肽、所述的單鏈抗體、鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域。

較佳地，所述的鉸鏈區(qū)為CD8 Hinge；所述的跨膜結(jié)構(gòu)域為CD8Transmembrane；所述的細(xì)胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域包含CD28和/或4-1BB，以及CD3z。

較佳地，所述的前導(dǎo)肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示、氨基酸序列如SEQ IDNO:3所示；所述的鉸鏈區(qū)的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示、氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；所述的跨膜結(jié)構(gòu)域的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示、氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。