[發明專利]一種高蟲草素產能的蛹蟲草菌種的長期保存方法

有效

• 申請號: 202010646944.1
• 申請日: 2020-07-07
• 公開（公告）號: CN111742785B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 劉曉紅
• 申請（專利權）人: 遼東學院
• 主分類號: A01G18/40
• 分類號: A01G18/40;A01G18/20
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

本發明屬于農業微生物技術領域，具體涉及一種高蟲草素產能的蛹蟲草菌種的長期保存方法。將蛹蟲草菌種接種到試管斜面培養基上，18?25℃恒溫培養箱中培養，待菌絲長滿斜面，獲得斜面菌種；斜面菌種在無菌環境下切塊，獲得含有菌絲的菌塊；向凍存管中加入保護液和含有菌絲的菌塊，并使保護液完全浸沒菌塊，將凍存管采用變溫處理方法進行保藏預處理，然后取凍存管進行檢驗，選擇存活的菌種于?80℃長期保藏。本發明采用包含銀杏果粉的培養基，可保持蛹蟲草菌種的產蟲草素活性。本發明還采用“室溫降至?10℃，然后升溫至4℃，最后降至?80℃”的變溫處理方法，提高菌種抗低溫性能，保留蛹蟲草菌種的活性。

技術領域

本發明屬于農業微生物技術領域，具體涉及一種高蟲草素產能的蛹蟲草菌種的長期保存方法。

背景技術

蛹蟲草屬于子囊菌亞門麥角菌科蟲草屬，是重要的中藥材。蛹蟲草中含有的蟲草素是核苷類抗生素，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗腫瘤的活性，具有很高的營養價值和藥用價值。高蟲草素產能的蛹蟲草菌種的篩選和保存工作是分離提取蟲草素的重要前提。自然界生長的蛹蟲草數量少產量低，因此人工培養高蟲草素蛹蟲草技術逐漸興起。

現有技術存中，蛹蟲草菌種的保藏方法主要包括4-15℃試管斜面冷藏、26℃空調房保藏、4-15℃試管斜面加石蠟油冷藏、26℃試管斜面加無菌水空調方保藏等方法，其中26℃空調房保藏和26℃試管斜面加無菌水空調方保藏的方法適用于短期保藏，能夠有效保證當代菌種活性，可以隨取隨用，但是該溫度下菌種繁殖快，不利于后代菌種的保藏。4-15℃試管斜面冷藏由于溫度較低，菌種可長時間存活，所以是長期保藏蛹蟲草菌種的重要手段，但斜面長時間冷藏后菌種的活性會降低，往往需要復壯操作，有些菌種長期冷藏后復壯不成功，存在蟲草素生產活性降低的風險，導致蟲草素產量降低。因此，需要開發一種能夠保持蟲草素生產活性的蛹蟲草菌種長期保藏方法。

發明內容

本發明提供的一種高蟲草素產能的蛹蟲草菌種的長期保存方法，該方法保藏后能夠保持蛹蟲草的蟲草素生產活性。

本發明的目的是提供一種高蟲草素產能的蛹蟲草菌種的長期保存方法，包括以下步驟：將蛹蟲草菌種接種到試管斜面培養基上，18-25℃恒溫培養箱中培養，待菌絲長滿斜面，獲得斜面菌種；

斜面菌種在無菌環境下切塊，獲得含有菌絲的菌塊，備用；

向凍存管中加入保護液和含有菌絲的菌塊，并使保護液完全浸沒菌塊，將凍存管采用變溫處理方法進行保藏預處理，然后取凍存管進行檢驗，選擇存活的菌種于-80℃長期保藏；

所述變溫處理方法的溫度變化范圍為：室溫降至-10℃，然后升溫至4℃，最后降至-80℃。

優選的，上述保藏方法中，所述試管斜面培養基的配方如下：土豆180g、銀杏果粉20-30g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀0.5g、磷酸氫二鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、瓊脂20g、蒸餾水補足1000mL，自然pH。

優選的，上述保藏方法中，所述試管斜面培養基的配方如下：土豆180g、銀杏果粉20g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀0.5g、磷酸氫二鉀0.5g、硫酸鎂0.5g、瓊脂20g、蒸餾水補足1000mL，自然pH。

優選的，上述保藏方法中，所述試管斜面培養基按照以下方法制備：

按所述配方稱量土豆、銀杏果粉、葡萄糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、瓊脂；

將土豆切片，加入小于500-800mL的水中，煮沸20min，紗布過濾，收集土豆濾液；

向土豆濾液中加入葡萄糖、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、硫酸鎂和瓊脂，用蒸餾水補足1000mL，加熱攪拌直至所有物料溶解，加入銀杏果粉，混勻后滅菌，擺斜面。

優選的，上述保藏方法中，所述變溫處理方法按照室溫、4℃、-10℃、4℃、-20℃、-80℃的溫度順序進行保藏預處理。