[發(fā)明專利]一種用于血清中葉酸含量檢測的釋放劑、制備及應(yīng)用

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• 申請日: 2020-07-07
• 公開（公告）號: CN111624075A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳祥;龔芳;陸安黎;劉倩;白仲虎
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇拜明生物技術(shù)有限公司;江南大學(xué)
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/38;G01N33/82;G01N21/76
• 代理公司: 無錫盛陽專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32227
• 代理人: 顧吉云;郭金玉

本發(fā)明提供了一種用于血清中葉酸含量檢測的釋放劑、制備及應(yīng)用，其能有效釋放樣本中結(jié)合態(tài)的葉酸分子，提高檢測的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。一種用于血清中葉酸含量檢測的釋放劑，其特征在于，包括穩(wěn)定劑、變性劑、中和劑；穩(wěn)定劑為含有0.67%2?氯乙酰胺、2.66%維生素C及0.21%TCEP的水溶液；變性劑為含有4.82%氫氧化鈉、2.97%硼酸的水溶液；中和劑為含有13.60%磷酸二氫鉀、0.05%碘酸鉀的水溶液。上述釋放劑的制備方法，其特征在于：穩(wěn)定劑、變性劑、中和劑分別按量稱取原料后、混勻。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)療器械生物類免疫體外診斷領(lǐng)域，具體涉及一種用于血清中葉酸含量檢測的釋放劑、制備及應(yīng)用。

背景技術(shù)

葉酸在體內(nèi)的主要活性形式為四氫葉酸，含量缺乏時(shí)，細(xì)胞內(nèi)DNA合成減少導(dǎo)致細(xì)胞的分裂成熟發(fā)生障礙，可引起巨幼紅細(xì)胞性貧血、皮膚病變、神經(jīng)病變與精神障礙、高同型半胱氨酸血癥（增加心血管病風(fēng)險(xiǎn)）、阿爾茲海默癥等疾病，也有報(bào)道認(rèn)為與腫瘤有密切的關(guān)系，其機(jī)理主要與基因多態(tài)性及一碳代謝有關(guān)；甚至也有報(bào)道認(rèn)為過量的葉酸可能會(huì)改變?nèi)说幕?。此外，葉酸是胎兒生長發(fā)育不可缺少的營養(yǎng)素，孕婦缺乏葉酸有可能導(dǎo)致胎兒出生時(shí)出現(xiàn)低體重、唇腭裂、心臟缺陷等。如果在孕期前3個(gè)月內(nèi)缺乏葉酸，可引起胎兒神經(jīng)管發(fā)育缺陷，而導(dǎo)致畸形。需要注意的是過量的葉酸，非但不能預(yù)防胎兒畸形，還可能會(huì)掩蓋維生素缺乏癥狀，干擾鋅代謝，引起機(jī)體鋅缺乏，加重妊娠反應(yīng)及增加分娩合并癥。

由于葉酸對人體的多種生理功能具有非常重要的意義，特別是針對婦幼群體及老年群體，臨床上對其含量的檢測相對較為重視。因人類腸道細(xì)菌能合成葉酸，故一般不易缺乏。但是當(dāng)吸收不良、代謝失?；蜷L期使用腸道抑菌藥物時(shí)，可造成葉酸缺乏。

葉酸在體內(nèi)多與葉酸結(jié)合蛋白以復(fù)合物的形式存在，在對人體樣本進(jìn)行檢測時(shí)，如不對樣本進(jìn)行預(yù)處理釋放出結(jié)合態(tài)的葉酸分子，則檢測結(jié)果準(zhǔn)確度及重復(fù)性均較差。本發(fā)明旨在闡述一種高效、簡單、快速的釋放劑，并應(yīng)用于相應(yīng)的免疫檢測方法中。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明提供了一種用于血清中葉酸含量檢測的釋放劑、制備及應(yīng)用，其能有效釋放樣本中結(jié)合態(tài)的葉酸分子，提高檢測的準(zhǔn)確度及重復(fù)性。

一種用于血清中葉酸含量檢測的釋放劑，其特征在于，包括穩(wěn)定劑、變性劑、中和劑；

所述穩(wěn)定劑為含有0.67% 2-氯乙酰胺、2.66%維生素C及0.21% TCEP的水溶液；

所述變性劑為含有4.82% 氫氧化鈉、2.97%硼酸的水溶液；

所述中和劑為含有13.60% 磷酸二氫鉀、0.05%碘酸鉀的水溶液。

上述釋放劑的制備方法，其特征在于：所述穩(wěn)定劑、所述變性劑、所述中和劑分別按量稱取原料后、混勻。

上述釋放劑在葉酸含量檢測中的應(yīng)用，包括以下步驟：

（1）將50μL的樣本、15μL的穩(wěn)定劑和35μL的變性劑先后加入至樣本處理管中，混勻并反應(yīng)，得到第一溶液；

（2）向所述第一溶液中加入50μL中和劑混勻并反應(yīng)。

進(jìn)一步的，步驟（1）中所述反應(yīng)的條件為37℃下反應(yīng)10分鐘；

步驟（2）中所述反應(yīng)的條件為37℃下反應(yīng)1分鐘。

本發(fā)明的釋放劑，可有效、完全釋放樣本中的葉酸，檢測結(jié)果準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好，檢測結(jié)果與國際一線產(chǎn)品一致性較好，能夠應(yīng)用于血清樣品的葉酸含量檢測，該方法具有廣泛的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的釋放劑與貝克曼公司試劑盒檢測結(jié)果線性回歸圖。

圖2為本發(fā)明的釋放劑與貝克曼公司試劑盒檢測結(jié)果的相對偏差圖。