[發明專利]一株吉富羅非魚腦神經細胞系、轉染方法、培養方法及其應用

有效

• 申請號: 202010646510.1
• 申請日: 2020-07-07
• 公開（公告）號: CN111690613B
• 公開（公告）日: 2022-02-22
• 發明（設計）人: 龍勇;劉冉;宋桂麗;李青;崔宗斌
• 申請（專利權）人: 中國科學院水生生物研究所
• 主分類號: C12N5/079
• 分類號: C12N5/079;C12N15/87;C12Q1/02;C12R1/91
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一株吉富羅非魚腦神經細胞系、轉染方法、培養方法及其應用。本申請從吉富羅非魚腦組織中分離培養了一株永生細胞系，命名為TBN。該細胞系具有類似神經元的形態特征，表達一系列神經細胞的標記基因，是一株神經前體細胞系；其對低溫敏感，不能在16℃及以下的低溫條件下存活；而且容易轉染，采用電穿孔方法轉染效率高達52％。該細胞系可以作為研究羅非魚抗寒相關基因功能的良好模型，填補相關領域空白。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一株吉富羅非魚腦神經細胞系、轉染方法、培養方法及其應用。

背景技術

羅非魚(Oreochromis sp.)具有生長快、抗病力強、營養豐富等優良性狀，是重要的水產養殖品種之一。但是其不耐低溫的特性導致養殖地域嚴重受到限制、養殖成本增加以及養殖效益降低。由于羅非魚個體大，具有筑巢和將受精卵含在口中孵化等習性，因此不易進行顯微注射等操作，難以像斑馬魚(Danio rerio)等研究模型一樣高效地開展靶向基因功能研究，因此目前對羅非魚耐寒性狀遺傳決定基礎的認識還很不足。

魚類的不同組織中以腦神經系統對低溫損傷最敏感。在致死低溫暴露過程中，平衡能力的喪失是魚體產生低溫損傷的最早表現，而且即使將受損的魚放回正常溫度也難以恢復。因此，建立既具有低溫敏感特征、又能被高效轉染的羅非魚腦神經細胞系，突破應用活體羅非魚進行基因功能研究的局限，對于解析抗寒相關基因的功能和作用機制具有重要的意義。

吉富羅非魚是通過對尼羅羅非魚(Oreochromis niloticus)進行系統的遺傳選育而獲得的新品系，其生長速度明顯提高，但是耐寒能力卻顯著低于尼羅羅非魚基礎群體。雖然目前已經從尼羅羅非魚和莫桑比克羅非魚(Oreochromis mossambicus)的腦、心臟、卵巢、腎臟、肝臟和唇上皮等組織中分離和建立了細胞系，如腦組織來源的TB2、TiB、OnlB和OmB等細胞系，但還沒有吉富羅非魚的腦神經細胞系。研究者們建立這些羅非魚細胞系的主要目的是用于分離和培養病毒，而且這些細胞系都無法商業獲取，有的細胞系報道的時間已經非常久遠。

發明內容

針對現有技術存在的問題，本發明提供了一株吉富羅非魚腦神經細胞系、轉染方法、培養方法及其應用，目的在于解決現有技術中的一部分問題或至少緩解現有技術中的一部分問題。

本發明是這樣實現的，一株吉富羅非魚腦神經細胞系，保藏編號為CCTCC NO:C2020106，已于2020年6月17日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：中國.武漢.武漢大學，名稱為吉富羅非魚腦神經細胞。該細胞既具有低溫敏感特征、又能被高效轉染。

如上述的吉富羅非魚腦神經細胞系的轉染方法，包括電穿孔轉染和轉染試劑轉染，優選為電穿孔轉染。

如上述的吉富羅非魚腦神經細胞系的培養方法，培養基為Leibovitz’s L-15，培養基中FBS的質量百分比大于2.5％，小于20％，培養溫度為26-32℃。

進一步地，培養溫度優選為32℃。

如上述的吉富羅非魚腦神經細胞系、或轉染方法、或培養方法在吉富羅非魚靶向基因功能研究中的應用。

進一步地，所述應用的方法中，吉富羅非魚腦神經細胞系的識別特征分子包括timp2b，tagln，s100a10a，prdx1，rps12，apoeb，rps25，s100a10b，clu和tspan中的至少一種。

綜上所述，本發明的優點及積極效果為：