[發明專利]一種快速構建血漿DNA測序文庫的方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202010641329.1
• 申請日: 2014-06-24
• 公開（公告）號: CN111748606A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 陳迪;李亞麗;李天成;石燕濱;張江花;吳凱
• 申請（專利權）人: 北京貝瑞和康醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;謝燕軍

1.用于構建血漿DNA測序文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)抽提血漿DNA；

2)任選將血漿DNA進行末端補平，獲得末端補平后的血漿DNA；

3)將任選末端補平后的血漿DNA進行3’懸A，獲得3’懸A后的血漿DNA；

4)將3’懸A后的血漿DNA與測序接頭連接，獲得連接產物；

5)對連接產物進行純化，獲得純化產物。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟4)通過選自以下的一種或兩種酶來進行：T4 DNA連接酶和T7 DNA連接酶。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測序接頭為雙鏈的測序接頭。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述3’懸A采用klenow ex-酶、Taq酶、或klenow ex-酶與Taq酶的組合。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟2)和3)之間進行純化步驟；或所述步驟2)和3)在一個反應體系中進行，中間沒有純化步驟。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟2)采用T4DNA聚合酶進行；且所述步驟3)采用Taq酶進行。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟3)和4)之間進行純化步驟；或步驟2)、3)和4)在一個反應體系中進行，中間沒有純化步驟。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟2)采用T4DNA聚合酶進行；所述步驟3)采用Taq酶進行；且所述步驟4)采用T4 DNA連接酶和T7 DNA連接酶進行。

9.用于構建血漿DNA測序文庫的試劑盒，其特征在于，包含：

-任選地將血漿DNA進行末端補平的試劑，包括dNTP、用于末端補平的酶、和末端補平緩沖液；

-進行3’懸A的試劑，包括dATP、用于末端懸A的酶、和末端懸A緩沖液；

-與測序接頭連接的試劑，包括測序接頭、連接酶、和連接緩沖液；和

-對連接產物進行純化的試劑和裝置。

10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述連接酶選自以下中的一種或兩種：T4 DNA連接酶和T7 DNA連接酶。

11.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述測序接頭為雙鏈的測序接頭。

12.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述所述用于末端懸A的酶為klenowex-酶、Taq酶、或klenow ex-酶與Taq酶的組合。

13.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述用于末端補平的酶為T4 DNA聚合酶。

14.根據權利要求12或13所述的試劑盒，其特征在于，所述用于末端補平的酶為T4 DNA聚合酶；所述用于末端懸A的酶為Taq酶。

15.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述用于末端補平的酶為T4 DNA聚合酶；所述用于末端懸A的酶為Taq酶；用于連接的酶為T4 DNA連接酶和T7 DNA連接酶；且用于連接的接頭為雙鏈接頭。

16.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述對連接產物進行純化的試劑選自無菌dH₂O或洗脫緩沖液；對連接產物進行純化的裝置選自純化柱、Qiagen柱、純化磁珠或Beckman Ampure XP beads。