[發(fā)明專利]一種用于檢測固體樣品中雜環(huán)胺的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010638832.1
• 申請日: 2020-07-06
• 公開（公告）號: CN111679021B
• 公開（公告）日: 2023-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐獻(xiàn)兵;馬云嬌;胡蔣寧;單詩慧;杜明;熊璞
• 申請（專利權(quán)）人: 大連工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88;G01N30/74;G01N30/72
• 代理公司: 大連格智知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21238
• 代理人: 張蕊;劉琦

1.一種用于檢測固體樣品中雜環(huán)胺的方法，其特征在于，準(zhǔn)備固體樣品快速凈化試劑盒，所述試劑盒包括第一提取試劑和第二提取試劑，所述第一提取試劑由氯化鈉、SDS、碳酸鈉、醋酸鉛中的一種或多種組成；所述第二提取試劑為Fe₃O₄@PDA；

所述Fe₃O₄@PDA的制備方法，包括步驟：

Sa1：取三羥甲基氨基甲烷，溶于超純水中，用鹽酸調(diào)至pH為8.5，得到Tris-HCl溶液；所述三羥甲基氨基甲烷和超純水的質(zhì)量體積比是（1~10）:2g/L；

Sa2：取多巴胺，溶于步驟Sa1所述Tris-HCl溶液中，得到PDA-Tris-HCl溶液；所述多巴胺與Tris-HCl溶液的質(zhì)量體積比是（1~10）:2g/L；

Sa3：取四氧化三鐵，置于PDA-Tris-HCl溶液中，超聲使四氧化三鐵在溶液中分散均勻，得到Fe₃O₄@PDA制備液，震蕩；所述四氧化三鐵與PDA-Tris-HCl溶液的質(zhì)量體積比是（1~10）:2g/L；所述震蕩參數(shù)為：100~300rpm，室溫震蕩2~12h；

Sa4:用磁鐵將震蕩后的Fe₃O₄@PDA制備液中的固液分離，棄去液體；依次加入醇和去離子水多次清洗固體，磁力分離，棄去液體；干燥，得到Fe₃O₄@PDA；所述醇是甲醇或乙醇；

按如下步驟應(yīng)用：

Sb1：取第一提取試劑，溶于超純水中，得到第三提取試劑；所述第一提取試劑和超純水的質(zhì)量體積比是（2~20）:50g/mL；

Sb2：取待凈化樣品，加入第三提取試劑A，勻漿，得勻漿液；用第三提取試劑B洗滌勻漿機(jī)刀頭，將洗滌后所得液體與所述勻漿液混合，離心取上清液；取所述上清液，加入第二提取試劑，漩渦震蕩，磁力分離取固體后棄去上清液，將所得固體加入甲醇，漩渦震蕩，磁力分離固體，取甲醇層，得凈化樣品制備液；

其中，所述待凈化樣品是固體樣品；所述待凈化樣品和所述第三提取試劑A的質(zhì)量體積比為（1~5）:10g/mL；所述上清液和所述第二提取試劑的體積質(zhì)量比為（0.5~5）:（5~100）mL/mg；所述甲醇的添加量為0.5~5mL；

Sb3：不取待凈化取樣品，其余操作同步驟Sb2，得到試樣空白液；

此后，按下述方法，以試樣空白液為對照，對凈化樣品制備液中的雜環(huán)胺進(jìn)行測定，再通過公式計算待凈化樣品中的雜環(huán)胺含量：

Sc1：所述凈化樣品制備液過0.22μm的有機(jī)系微孔濾膜，然后進(jìn)行高效液相色譜串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜測定；色譜條件：色譜柱：C8?2.1×100mm分析柱；流動相A：10mM乙酸銨溶液，流動相B：乙腈，梯度洗脫程序：0~0.1min：10%B，0.1~18min：10%~30%B，18~20min：30%~100%B，20~21min：100%~10%B，21~25min：10%B；流速：0.3mL/min；柱溫：35℃；進(jìn)樣量：1μL；得到第一色譜圖；所述雜環(huán)胺的質(zhì)譜條件如下：

Sc2：以甲醇為溶劑，配制六個不同質(zhì)量體積濃度的雜環(huán)胺混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，該六個標(biāo)準(zhǔn)溶液中雜環(huán)胺的質(zhì)量體積濃度依次分別為：0.50ng/mL、1.00ng/mL、5.00ng/mL、50.00ng/mL、250.00ng/mL、1000.00ng/mL；將雜環(huán)胺系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液于附帶三重四級桿質(zhì)譜的高效液相色譜儀中測定，得第二色譜圖，由第二色譜圖得到系列標(biāo)準(zhǔn)溶液中雜環(huán)胺在該色譜條件下的出峰時間和不同濃度的峰面積；并以標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量體積濃度為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制雜環(huán)胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作曲線；

Sc3：根據(jù)步驟Sc1測得的凈化樣品制備液的峰面積值，從步驟Sc2繪制的系列雜環(huán)胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作曲線上找到峰面積值對應(yīng)的雜環(huán)胺的含量，按下式計算待測固體樣品中雜環(huán)胺的含量X：

式中：X表示試樣，即待凈化樣品中的雜環(huán)胺含量，單位ng/g；C₁表示步驟Sc1測得的樣品制備液的峰面積所對應(yīng)的雜環(huán)胺的含量，單位ng/mL；C₀表示試樣空白液中雜環(huán)胺的含量，單位ng/mL；m表示試樣質(zhì)量，即所述待凈化樣品的質(zhì)量，單位g；V表示第三提取試劑的體積，即第三提取試劑A和第三提取試劑B的體積之和，單位mL；V₁表示凈化樣品制備液的體積，單位mL；V₂表示上清液的體積，單位mL；

其中，所述待凈化樣品為牛肉、雞肉或鯽魚。