[發明專利]一種純化酶、提取方法及試劑盒

在審

• 申請號: 202010638396.8
• 申請日: 2020-07-06
• 公開（公告）號: CN111748536A
• 公開（公告）日: 2020-10-09
• 發明（設計）人: 李昊;劉玲;徐李鵬
• 申請（專利權）人: 吉林基蛋生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N9/16;C12Q1/44;C12Q1/48
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 李外

1.一種純化酶的提取方法，其特征在于，該方法包括：

步驟一：將動物內臟器官去雜、沖洗，得到處理后的樣品；

步驟二：在步驟一處理后的樣品中加入緩沖液，調節PH至7.0-9.5，先使用打碎機進行打碎，然后再使用勻漿機進行細打碎，每次打碎10-30min，間隔1-5h，然后放置于常溫靜置24-72h；

步驟三：將步驟二獲得的靜置后的樣品進行鹽析，溶解8h-24h，常溫放置12-24h，然后進行離心，所述的離心速率為3000-11000r/min，離心時間為5-25min，再過濾，凍干，得到凍干樣品；

步驟四：使用沖洗緩沖液步驟四的凍干樣本進行溶解，然后使用3000-11000r/min離心5-25min，過濾，利用凝膠層析柱進行分離，再運用中空纖維柱技術對其進行換液、濃縮，即得到純化酶。

2.根據權利要求1所述的一種純化酶的提取方法，其特征在于，所述的步驟二的緩沖液為50-200mM/L磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、TRIS鹽緩沖液、磷酸緩沖液中的一種，pH在8-12之間。

3.根據權利要求1所述的一種純化酶的提取方法，其特征在于，所述的步驟三中鹽析所用的鹽為氯化鈉、硫酸銨、氯化鈣、氯化鎂中的一種或多種組成，濃度為0.1-150g/L。

4.根據權利要求1所述的一種純化酶的提取方法，其特征在于，所述的步驟四的沖洗緩沖液為20-100mM/L磷酸鹽緩沖液、硼酸緩沖液、甘氨酸-檸檬酸緩沖液、Tris緩沖液、PIPES緩沖液、檸檬酸緩沖液中的一種，pH在7-12之間。

5.根據權利要求1所述的一種純化酶的提取方法，其特征在于，所述的步驟四用中空纖維柱技術對其進行換液、濃縮中，所用的緩沖液為20-100mM/L磷酸鹽緩沖液、硼酸緩沖液、甘氨酸-檸檬酸緩沖液、Tris緩沖液、PIPES緩沖液、檸檬酸緩沖液中的一種，濃縮倍數為2-15倍。

6.權利要求1-5任一項所述的方法得到的純化酶。

7.包括權利要求6所述的純化酶的一種試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括R1和R2試劑，其中R1包括第一緩沖液、純化酶、表面活性劑、試劑穩定劑；

R2包括第二緩沖液、激活劑。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的第一緩沖液和第二緩沖液分別為Tris、磷酸鹽、碳酸鹽、硼酸緩沖液中的一種，濃度為1.0-300g/L。

9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的激活劑為EDTA-2K、EDTA-2Na中的一種，濃度為0.1-200g/L。

10.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述的表面活性劑為吐溫系列、曲拉通系列中的一種，濃度為1-10mL/L。