[發明專利]一種天麻素與PEGA樹脂共價偶聯合成親合層析樹脂的方法及其應用

有效

• 申請號: 202010637803.3
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN112007623B
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 郭曉汐;劉雅婷;曲媛;郝倩;徐天瑞
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: B01J20/281
• 分類號: B01J20/281;B01J20/30;B01D15/08;G01N27/62
• 代理公司: 昆明人從眾知識產權代理有限公司 53204
• 代理人: 李曉亞

本發明公開一種天麻素與PEGA樹脂共價偶聯合成親合層析樹脂的方法及其應用，制備步驟包括：PEGA樹脂的預處理、PEGA樹脂的平衡、PEGA樹脂的活化、PEGA樹脂與反應催化物的結合、PEGA樹脂與天麻素的共價偶聯得到天麻素與PEGA樹脂共價偶聯親合層析樹脂；本發明制備得到的天麻素與PEGA樹脂共價偶聯親合層析樹脂可以運用于天麻素特異性結合分子靶點的篩選和鑒定，本發明步驟較少，操作簡便，同時使用了新的反應催化劑，更加安全。

技術領域

本發明屬于化學合成及分子藥理學研究領域，涉及天麻素與PEGA樹脂的共價偶聯及以此為基礎的親合層析法篩選鑒定天麻素化合物特異性分子靶點的應用。

背景技術

天麻是傳統中藥里的常用配方，中醫臨床上用其治療多種心腦血管疾病，如神經過度緊張、腦缺血及缺血性中風、帕金森氏病等。天麻的主要活性成分為：天麻素（即天麻苷）及其多聚物巴利森苷、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛、香草醛和天麻多糖等。天麻具有顯著的鎮靜安神和保護神經系統的藥理作用。但由于天麻素等活性單體的直接作用分子靶點尚未明確，使得這些天然活性化合物的成藥研究難以取得突破性進展。西醫理論要求藥物的化學結構明確、作用靶點明確、作用機制明確，而中藥多以復方混合成分為主，分離鑒定主要的活性成分并找到它們對應的分子靶點借以闡明其作用機理是困擾中藥國際化研究的最大難題。云南中藥資源豐富，與天麻類似，三七、白芨、靈芝等功效顯著的中藥活性成分由于靶點不明、藥物與靶蛋白結合的構效關系不明、作用的主要信號通路不明，所以在西藥研究的科學范式下難以成藥，更無法得到國際市場的認可。目前篩選鑒定藥物作用靶點的方法有很多，但最為常用且最有效的是親合層析法。

發明內容

本發明為了拓展云南特色藥用植物研究的新領域，快速鑒定天麻中功效明確但藥理機制不明的活性成分以利于其成藥及推向國際化，提供一種天麻素與PEGA樹脂共價偶聯合成親合層析柱的方法及應用。

本發明的技術方案如下：

一種天麻素與PEGA樹脂共價偶聯合成親合層析樹脂的方法，具體步驟如下：

（1）PEGA樹脂的預處理：

取300-500mgPEGA樹脂用pH8.0的Tris-HCL緩沖液1mL重懸，于小容量瓶中充分混合攪拌30分鐘；

（2）PEGA樹脂的平衡：

將預處理后的樹脂用DMF重懸后轉移至3mL玻璃柱料管中，靜置，待樹脂全部沉降后，用pH8.0的Tris-HCL緩沖液過柱平衡樹脂3次，每次2mL；

（3）PEGA樹脂的活化：

待平衡緩沖液流盡后，向柱料管中加入吡啶過柱沖洗柱料3次，每次2mL，然后用DMF將樹脂從柱料管中重懸后移出至小型圓底反應瓶中；

（4）PEGA樹脂與反應催化物的結合：

向反應瓶中加入溴代乙酸乙酯至濃度達到0.088mmol/L，并不斷攪拌混合6小時后，將樹脂用DMF重懸后轉移至柱料管中，依次用二氯甲烷、甲醇、DMF分別過柱沖洗3次，每次3mL；

（5）PEGA樹脂與天麻素的共價偶聯：

將PEGA樹脂從柱料管中用DMF重懸后轉移至反應瓶中，加入天麻素至終濃度為0.08mmol/L，加入碳酸鉀至終濃度為0.08mmol/L，并不斷攪拌混合，反應3天后移至柱料管中，得到天麻素與PEGA樹脂共價偶聯親合層析樹脂。

本發明的另一個目的是將上述所合成天麻素與PEGA樹脂共價偶聯親合層析樹脂用于篩選和鑒定天麻素的直接結合靶點，從而進一步闡明其藥理機制。

本發明的有益效果在于：