[發(fā)明專利]一種血清中鐵蛋白快速免疫檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010637537.4
• 申請日: 2020-07-05
• 公開（公告）號: CN111693717A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳祥;孫楊;孫姍姍;陸安黎;劉倩;白仲虎
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇拜明生物技術(shù)有限公司;江南大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/535;G01N33/532;G01N21/76
• 代理公司: 無錫盛陽專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32227
• 代理人: 顧吉云;郭金玉

1.一種血清中鐵蛋白快速免疫檢測試劑盒，其特征在于，包括校準(zhǔn)品、生物素標(biāo)記的鐵蛋白抗體溶液、辣根過氧化物酶標(biāo)記的鐵蛋白抗體的溶液、鏈霉親和素包被的化學(xué)發(fā)光板、洗液和底物溶液；

所述校準(zhǔn)品包括濃度為0 ng/mL、50 ng/mL、150 ng/mL、400 ng/mL、800ng/mL的鐵蛋白抗原溶液；

所述生物素標(biāo)記的鐵蛋白抗體溶液的濃度為2μg/mL；

所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的鐵蛋白抗體溶液的濃度為0.4μg/mL；

所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的鐵蛋白抗體溶液中含有未標(biāo)記的鐵蛋白抗體0.4μg/mL；

所述鏈霉親和素包被板的鏈霉親和素包被濃度為20μg/mL；

所述洗液為含1%吐溫20和0.1%Proclin300的0.05M、pH值為7.5的Tris-HCl溶液；

所述底物溶液包括溶液A和溶液B，溶液A為含有0.4%魯米諾，pH9.0的水溶液，溶液B為含有0.06%Na₂B₄O₇，pH5.0的水溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種血清中鐵蛋白快速免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述校準(zhǔn)品均由鐵蛋白抗原與0.1M、pH值為7.2的磷酸鉀緩沖液配制得到，所述鐵蛋白抗原購自杭州伊百新生物技術(shù)有限公司，貨號為A049。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種血清中鐵蛋白快速免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述生物素標(biāo)記的鐵蛋白抗體的配制方法為：取1.0mg鐵蛋白捕獲抗體，使用超濾濃縮離心管按照使用說明書進(jìn)行換液處理，最后收集到1mL的抗體溶液，換液所用溶液為0.1mol/L、pH7.0的PB；向換液處理后的抗體溶液中加入0.3mg的Sulfo-NHS-LC-Biotin，混合均勻后，室溫反應(yīng)1小時，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)至分子截留量為14000Da的透析袋中，夾緊口，置于1L的0.1M PB、pH7.0透析液中，于2-8℃冰箱中200rpm攪拌透析2次，每次5小時，收集透析后的樣品，將制備的樣品稀釋至2μg/mL；所述鐵蛋白捕獲抗體購自Roche，貨號為11547119103。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種血清中鐵蛋白快速免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述辣根過氧化物酶標(biāo)記的鐵蛋白抗體的配制方法為：稱取4mg HRP溶于1mL的去離子水中，緩慢加入200μL的0.1mol/L NaIO4溶液，溶解并混合混勻后，2-8℃避光反應(yīng)0.5小時，HRP因被氧化，溶液顏色由棕色變?yōu)榫G色；向溶液中加入40μL的10%乙二醇，室溫避光反應(yīng)0.5小時，溶液顏色由綠色變?yōu)樽厣?，酶活化完畢；將活化的酶加入?mg已脫鹽的鐵蛋白檢測抗體溶液中，混合均勻，液轉(zhuǎn)至分子截留量為14000Da的透析袋中，夾緊口，置于1L的0.05M CB、pH9.6透析液中，于2-8℃冰箱中200rpm攪拌透析2次，每次5小時；轉(zhuǎn)移出反應(yīng)液，再加入64μL5mg/mL的NaBH4，混勻后室溫避光反應(yīng)2小時；反應(yīng)結(jié)束后攪拌中緩慢加入等體積的飽和硫酸銨，2-8℃鹽析2小時，6000r/min離心10分鐘，棄上清，用0.1M PB、pH7.0溶液溶解沉淀；將制備得到的酶標(biāo)記抗體稀釋至0.4μg/mL；所述鐵蛋白檢測抗體購自Roche，貨號為11547089103。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種血清中鐵蛋白快速免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述鏈霉親和素包被板的制備過程為：用包被液將BSA-biotin和鏈霉親和素分別稀釋至6μg/mL和20μg/mL，向包被孔中注入200μL BSA-biotin，2-8℃包被過夜；棄去孔內(nèi)溶液，洗滌3次后加入200μL的鏈霉親和素溶液，室溫放置4h；棄去孔內(nèi)溶液，洗滌3次后加入250μL的鏈封閉液，封閉過夜；棄去孔內(nèi)溶液，拍干殘留溶液，37℃烘干0.5h；所述鏈霉親和素購自杭州紐龍，名稱為重組核心鏈霉親和素2。

6.一種血清中鐵蛋白快速免疫檢測方法，其特征在于：使用權(quán)利要求1~5中任一所述檢測試劑盒進(jìn)行檢測。