[發明專利]一種加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法

在審

• 申請號: 202010636881.1
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111778285A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 周艷
• 申請（專利權）人: 南通大學
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864;C12N15/54;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 南京瑞弘專利商標事務所(普通合伙) 32249
• 代理人: 徐激波

1.一種加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的序列，其特征在于：包括，

Target，序列信息如SEQ ID NO:1；

Ppp2ca-RNAi-a，序列信息如SEQ ID NO:2；

Ppp2ca-RNAi-b，序列信息如SEQ ID NO:3；

PSC-1，序列信息如SEQ ID NO:4；

Ppp2ca(53604-1)-P1，序列信息如SEQ ID NO:5；

Ppp2ca(53604-1)-P2，序列信息如SEQ ID NO:6；

CMV-F，序列信息如SEQ ID NO:7；

pEGFP-N-3，序列信息如SEQ ID NO:8；

序列信息如SEQ ID NO:9。

2.一種加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：包括，

構建RNAi腺相關病毒載體；

用病毒包裝的輔助質粒和所述目的基因的RNAi腺相關病毒載體(高質量重組載體)共轉染AAV-293細胞，得到RNAi有效載體腺相關病毒；

將所述病毒注入C57BL/6小鼠體內即可。

3.如權利要求2所述的加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：還包括，構建目的基因過表達載體，用所述目的基因過表達載體和所述目的基因的RNAi腺相關病毒載體共轉染293T細胞后，通過觀察細胞熒光保證轉染效率大于等于70％，再收集細胞提取蛋白，檢測目的基因敲減情況。

4.如權利要求2或3所述的加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：所述構建RNAi腺相關病毒載體包括Ppp2ca-RNAi-a、Ppp2ca-RNAi-b的一種或幾種。

5.如權利要求4所述的加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：所述構建RNAi腺相關病毒載體，其為使用Target序列和U6-MCS-CAG-EGFP載體進行構建。

6.如權利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：所述構建目的基因過表達載體，其目的基因為Ppp2ca，載體名稱為GV143，酶切位點為XhoI/KpnI。

7.如權利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：所述RNAi有效載體腺相關病毒為rAAV9-Ppp2ca-RNAi，病毒滴度可達3.56E+12vg/ml。

8.如權利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：所述將所述病毒注入C57BL/6小鼠體內即可其為注射在腦室。

9.如權利要求2、3或5任一所述的加速tau病理在C57BL6小鼠腦內朊樣傳播的方法，其特征在于：在注射所述病毒8個月后的C57BL/6小鼠，均可以檢測出小鼠大腦有GFP的綠色熒光，提示了rAAV9病毒載體攜帶的基因在腦組織可以長期、穩定的表達。