[發明專利]一種肝細胞癌PDX模型構建方法

有效

• 申請號: 202010635046.6
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111948392B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 卓建勇;魯迪;王建國;連正星;張佳麗;李慧慧;岑貝妮;徐驍
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;A01K67/027
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 沈金龍

本發明公開了一種非疾病治療為目的的用于判定肝細胞癌PDX模型構建時成瘤率高低的組合物，以及利用該組合物的肝細胞癌PDX模型構建方法。本發明用于判定肝細胞癌PDX模型構建時成瘤率高低的組合物，包括肝細胞癌腫瘤組織樣品中的GPC3和Ki67，通過檢測這兩種蛋白，可以判斷PDX建模成瘤率。本發明預測肝細胞癌PDX模型成瘤的方法，通過對肝細胞癌患者腫瘤組織GPC3和Ki67的免疫組織化學結果判讀，早期預測PDX模型成瘤與否。早期預測PDX模型不可成瘤，可盡早排除構建PDX模型。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，特別是涉及一種肝細胞癌PDX模型構建方法。

背景技術

PDX(Patient-Derived Xenograft)患者來源腫瘤異種移植模型，是指將患者新鮮的腫瘤組織種植到免疫缺陷小鼠體內，從而獲得生長。PDX模型的特點是在最大程度上保留了患者腫瘤的形態與結構特征、基因特征以及分子特征，可以為研究腫瘤生物學、尋找標志物與篩選藥物靶點提供一個重要的平臺。PDX模型能夠準確反應抗腫瘤藥物療效，為臨床腫瘤患者的個體化精準治療提供重要的用藥建議和指導。我國是肝癌高發大國，其中90％的肝癌是肝細胞癌，位于中國60歲以下男性惡性腫瘤的首位。肝細胞癌患者5年生存率不足20％，即便手術切除仍有50％-70％的患者出現腫瘤復發，建立PDX模型進行敏感藥物的篩選可以為患者提供可靠有效的治療策略。

比如，公開號為CN105684989A的發明專利申請公開了一種肝癌PDX標準化模型庫所采用的一種規模化建立中國人群人源肝癌動物模型的方法，依次包括以下步驟：

a.將中國肝癌患者的新鮮腫瘤組織標本分為三個部分：

第一部分為將新鮮腫瘤組織塊立即液氮快速冷凍，用于DNA/RNA提取；

第二部分為將新鮮腫瘤組織塊在福爾馬林固定，石蠟包埋，用于組織病理學檢查；

第三部分為將新鮮腫瘤組織在無菌條件下切成10-20mm³的腫瘤組織塊，迅速植入免疫缺陷小鼠或放進冷凍介質并在液氮中保存；

b.使用生長因子，輔助接種腫瘤組織在免疫缺陷小鼠體內的生長，當腫瘤體積達500-1000mm³左右，對移植腫瘤進行體內傳代；

c.腫瘤組織的病理學鑒定；

d.基因分子遺傳學鑒定。

公開號為CN107137425A的發明專利申請公開了一種循環腫瘤細胞小鼠模型、其構建方法及應用，所述方法包括如下步驟：(1)皮下移植：將原代腫瘤組織樣本移植到免疫缺陷小鼠的體內，構建原代癌癥異種移植模型PDX；(2)采集循環腫瘤細胞：采集步驟(1)所述的原代癌癥異種移植模型的外周血中的循環腫瘤細胞；(3)腎囊膜移植：將步驟(2)采集的循環腫瘤細胞移植到免疫缺陷小鼠的腎囊膜內，即構建成功所述循環腫瘤細胞小鼠模型。

然而，相比其他腫瘤PDX模型，目前肝細胞癌PDX模型的建模成功率只有約40％，并且現階段還未出現能大幅度提高成瘤率的方法。因此，我們急需找到能預測肝細胞癌PDX模型的方法，及時為生命有限的腫瘤患者提供治療選擇。

發明內容

本發明針對現有技術中肝細胞癌PDX模型的建模成功率低的問題，提供了一種非醫學診斷為目的的用于判定肝細胞癌PDX模型構建時成瘤率高低的組合物，以及一種肝細胞癌PDX模型構建方法，通過預測肝細胞癌PDX模型成瘤率高低，選擇成瘤率高的樣品進行建模，而成瘤率低的樣品或者沒有成瘤可能性的樣品可以放棄建模。

本發明首先提供了一種非醫學診斷為目的的用于判定肝細胞癌PDX模型構建時成瘤率高低的組合物，包括肝細胞癌腫瘤組織樣品中的GPC3和Ki67，

判定時，將GPC3有表達定為GPC3陽性、否者為GPC3陰性；將細胞核Ki67表達的細胞比例大于8.5％定為Ki67陽性、否者為Ki67陰性，