[發明專利]一種間充質干細胞的制備方法與應用

在審

• 申請號: 202010634187.6
• 申請日: 2020-07-02
• 公開（公告）號: CN111635886A
• 公開（公告）日: 2020-09-08
• 發明（設計）人: 張俊琴
• 申請（專利權）人: 成都恩喜醫療管理有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/071;A61K35/28;A61P25/28
• 代理公司: 成都明濤智創專利代理有限公司 51289
• 代理人: 劉曉政

本發明涉及間充質干細胞技術領域，且公開了一種間充質干細胞的制備方法，包括以下步驟：1)從骨髓中收集樣本，將血液樣本和細胞分離液加入分離罐中進行細胞分離，得到細胞胚胎，使胚胎體附著到培養皿以誘導胚胎體自發分化為間充質干細胞，以增殖性方式培養間充質干細胞，對細胞進行分選以獲得間充質干細胞，同時維持間充質干細胞的一致性。該間充質干細胞的制備方法與應用，提升間充質干細胞的抗炎能力并促進其細胞外囊泡大量釋放，通過鼻內注入間充質干細胞及細胞外囊泡，抑制大腦小膠質細胞的激活，增加樹突棘(大腦中提供認知彈性的結構)的密度，對于阿茲海默癥有所療效。

技術領域

本發明涉及間充質干細胞技術領域，具體為一種間充質干細胞的制備方法與應用。

背景技術

間充質干細胞是一種多能干細胞，它具有干細胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力，在臨床應用也最多，與造血干細胞聯合應用，可以提高移植的成功率，加速造血重建，當患者接受大劑量化療后，將間充質干細胞與造血干細胞一同輸入，可明顯加速患者血細胞恢復時間，且安全無不良反應。

通過鼻內注射細胞外囊泡能減少炎癥，而炎癥被認為是阿爾茨海默病的主要因素，從而加強了這一觀點，它們還會引發保護大腦神經元免受進一步退化影響的行動，通過非侵入性途徑應用細胞外囊泡方式并配合其抗炎功效，提供了一種間充質干細胞的制備方法與應用加強對間充質干細胞的研究。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種間充質干細胞的制備方法與應用，針對間充質干細胞及細胞外囊泡在阿爾茨海默病上應用的問題。

(二)技術方案

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種間充質干細胞的制備方法，包括以下步驟：

1)從健康的人類捐獻者的骨髓中收集樣本，將血液樣本和細胞分離液加入分離罐中進行細胞分離，得到細胞胚胎，使胚胎體附著到培養皿以誘導胚胎體自發分化為間充質干細胞，以增殖性方式培養間充質干細胞，對細胞進行分選以獲得間充質干細胞，同時維持間充質干細胞的一致性；

2)將獲得的間充質干細胞轉移至培養罐，向培養罐中加入微載體以使間充質干細胞貼附微載體生長，向培養罐中加入培養基，排出培養罐中的廢液，并向培養罐中加入微載體，以使間充質干細胞擴增；

3)當細胞密度接近90％時，加入含有抗壞血酸的完全培養液培養8-9天，用稱為細胞因子的蛋白質對間充質干細胞進行預處理，以增強間充質干細胞的抗炎能力并促進其細胞外囊泡釋放；

4)加入脫細胞液分離細胞外囊泡以及間充質干細胞；

5)收集獲得的間充質干細胞和細胞外囊泡終產品，進行細胞洗滌后包裝。

優選的，細胞外囊泡作為細胞間通信的一種形式在細胞間運輸貨物，細胞外囊泡包括DNA、RNA和蛋白質，可以清除細胞中的有害物質，本方法采用的細胞外囊泡不含動物源成分。

優選的，所述培養基內包括有α-MEM(液體培養基)和胎牛血清，它們的體積比為(4-9):1，并且培養基含有抗生素，抗生素的含量為10～200U/mL，培養基中還含有抗壞血酸100-200uM。

本發明提供的間充質干細胞在治療阿茲海默癥領域的時，通過鼻內注入間充質干細胞及細胞外囊泡，抑制大腦小膠質細胞的激活，增加樹突棘(大腦中提供認知彈性的結構)的密度。

本發明提供的間充質干細胞在細胞培養時，可直接加入，延緩細胞衰老。

(三)有益效果

與現有技術相比，本發明提供了一種間充質干細胞的制備方法與應用，具備以下有益效果：