[發明專利]一種從發酵液中提取紐莫康定B0的方法與應用

有效

• 申請號: 202010634113.2
• 申請日: 2020-07-02
• 公開（公告）號: CN111925421B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 閆玉;張葵
• 申請（專利權）人: 北大方正集團有限公司;北大醫藥重慶大新藥業股份有限公司;北大醫療產業集團有限公司
• 主分類號: C07K7/56
• 分類號: C07K7/56;C07K1/14;C12P21/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 商秀玲

本發明涉及微生物發酵提取技術領域，具體公開了一種從發酵液中提取紐莫康定B0的方法與應用。本發明的從發酵液中提取紐莫康定B0的方法，其將紐莫康定B0的發酵液經酸化固液分離后，采用體積百分比為80％?85％的低級醇進行醇萃取，將得到的萃取液在pH值為3?3.5的條件下進行油泥分離后，降低經油泥分離后的萃取液中的所述低級醇的濃度，得到紐莫康定B0的粗品。本發明方法簡單穩定可控，能夠縮短生產周期，節約大量的有機溶媒，減少大量的固體廢棄物，從而節約了能源降低了生產成本。

技術領域

本發明涉及微生物發酵提取技術領域，具體地說，涉及一種從發酵液中提取紐莫康定B0的方法與應用。

背景技術

紐莫康定(Pneumocandins)是由Zalerion arboricola產生的一類天然抗真菌藥物，由于它對多種念珠菌、地方性真菌、曲霉及卡氏肺囊蟲均有效，因而越來越受到人們的關注。其主要作用機理是能夠非競爭性的抑制真菌細胞壁中葡聚糖合成酶的活性，進而引起真菌細胞壁的裂解以及細胞內外滲透壓的改變從而將真菌細胞徹底殺死。

紐莫康定B0(Pneumocandin B0)是合成抗真菌藥物卡泊芬凈(Caspofungin)的中間體，雜質太多會影響后面合成卡泊芬凈，且在分離工藝上不能成功的應用到大規模生產上。隨著對卡泊芬凈單雜的要求(0.1％)越來越高，那么其合成的中間體紐莫康定B0的純度要求也變得更高。紐莫康定B0的純度對后續產品的的合成收率以及成本有很大的關聯。

目前紐莫康定B0通行的提取純化方法是大孔樹脂吸附解析和硅膠層析進行純化，其需要大量的有機溶媒并且將產生很多的固體廢棄物。隨著環保意識的逐漸加強，在紐莫康定B0提純過程中，如何減少有機溶媒的使用量和減少固廢是當務之急。

因此，需要提供一種新的有效方法來解決現有技術中的問題。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種可節約大量的有機溶媒，并減少大量的固體廢棄物的從發酵液中提取紐莫康定B0的方法。

為了實現該目的，本發明的技術方案如下：

一種從發酵液中提取紐莫康定B0的方法，其是將紐莫康定B0的發酵液經酸化固液分離后，采用體積百分比為80％-85％的低級醇進行萃取，將得到的萃取液在pH值為3-3.5的條件下進行油泥分離后，降低經油泥分離后的萃取液中的所述低級醇的濃度，得到紐莫康定B0的粗品。

本發明發現將紐莫康定B0的發酵液以特定濃度低級醇萃取后的萃取液，在特定酸性條件下緩慢攪拌，可使其中的油脂和色素聚集析出，并實現有效的分離純化效果。

優選，紐莫康定B0的發酵液中，紐莫康定B0的色譜純度為45％-50％。

作為一個示例，本發明的紐莫康定B0的發酵液以如下方法制備得到：

(1)斜面種子培養：

斜面種子培養基：PDA培養基。

斜面種子培養條件：溫度23-25℃，培養時間11-13天。

(2)種子罐培養：

種子罐培養基：葡萄糖1.5-2.5％，黃豆餅粉0.8-1.2％，棉籽餅粉0.8-1.2％，玉米漿干粉0.4-0.6％，KH₂PO₄ 0.15-0.25％，pH值7.0-7.2。

種子罐培養條件：罐溫23-25℃，攪拌轉速190-210rpm，空氣流量0.8-1.2vvm，培養時間2.5-3.5天。

(3)發酵罐培養：