[發(fā)明專利]一種噬菌體與益生菌耦合發(fā)酵的微生態(tài)制劑及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010633982.3
• 申請日: 2020-07-04
• 公開（公告）號: CN111925995B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何四龍;胡懌林;徐旭凌;叢郁;謝曉莉;喬歡;陳海;費(fèi)文斌;黃杰;劉墨;靳菊
• 申請（專利權(quán)）人: 菲吉樂科（南京）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N1/20;C12N1/18;C12N1/16;A61K35/76;A61K36/064;A61P31/04;C12R1/92;C12R1/445;C12R1/125;C12R1/07;C12R1/25;C12R1/10;C12R1/145
• 代理公司: 北京維正專利代理有限公司 11508
• 代理人: 盛天亮

1.一種噬菌體與益生菌耦合發(fā)酵的微生態(tài)制劑，其特征在于：將噬菌體與益生菌耦合發(fā)酵后進(jìn)行固液分離，分離的液體用于制備水劑，分離的固體用于制備粉劑；所述噬菌體為副溶血性弧菌噬菌體VP46保藏編號為CCTCC NO：M 2016290，大腸桿菌噬菌體保藏編號為CCTCC NO：M 2018936，茄科雷爾氏菌噬菌體GP3保藏編號為 CCTCCNO：M 2016633；所述有益菌為金黃色葡萄球菌BP-13A保藏編號為CCTCC NO：M 2016535，枯草芽孢桿菌保藏編號為CCTCC AB 90008，屎腸球菌保藏編號為CICC 20430和植物乳桿菌保藏編號為CGMCCNo.14531。

2.如權(quán)利要求1所述的一種噬菌體與益生菌耦合發(fā)酵的微生態(tài)制劑，其特征在于：所述微生態(tài)制劑在pH為5-10范圍內(nèi)處理96h后其效價(jià)無明顯變化。

3.如權(quán)利要求1所述的一種噬菌體與益生菌耦合發(fā)酵的微生態(tài)制劑，其特征在于：所述微生態(tài)制劑中各噬菌體具有50°熱穩(wěn)定性。

4.如權(quán)利要求1所述的一種噬菌體與益生菌耦合發(fā)酵的微生態(tài)制劑，其特征在于：所述微生態(tài)制劑中各噬菌體具有耐1000psi高壓性。

5.一種制備權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的噬菌體與益生菌耦合發(fā)酵的微生態(tài)制劑的方法，其特征在于：其步驟如下： 步驟1，種子液制備：將活化后的宿主菌菌種，接入TSB培養(yǎng)基，接種比例為1～20%，培養(yǎng)溫度25～40℃，轉(zhuǎn)速20～240rpm，培養(yǎng)時(shí)間4～30h，獲得宿主菌種子液；將活化后的益生菌菌種，接入種子培養(yǎng)基，接種比例為1～20%，培養(yǎng)溫度25～40℃，轉(zhuǎn)速20～240rpm，培養(yǎng)時(shí)間4～30h，獲得益生菌種子液； 步驟2，發(fā)酵培養(yǎng)：將噬菌體和宿主菌種子液接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵4～30h，獲得噬菌體發(fā)酵液，發(fā)酵液經(jīng)0.22μm膜除菌，將益生菌種子液接入到無菌噬菌體發(fā)酵液中，發(fā)酵6～120h，獲得噬菌體和益生菌的發(fā)酵液； 步驟3，分離提取：將步驟2中的發(fā)酵液通過采用絮凝、離心或膜過濾中的一種或多種分離工藝，獲得發(fā)酵除菌清液和菌體； 步驟4，無菌包裝：將步驟3中的發(fā)酵除菌清液無菌包裝，獲得噬菌體和益生菌代謝產(chǎn)物混合物的水劑；向步驟3中的菌體添加菌體量1～10倍量的保護(hù)劑和/或載體，乳化混勻后干燥，粉碎過篩，無菌包裝，獲得噬菌體和益生菌混合物的粉劑。