[發明專利]一株貝萊斯芽孢桿菌SN-1及其發酵生產胞外多糖的方法

在審

• 申請號: 202010632553.4
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111621448A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 烏日娜;武俊瑞;曹承旭
• 申請（專利權）人: 沈陽農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P19/04;C08B37/00;C12R1/07
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 周媛媛;李馨

1.貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)SN-1，于2020年06月08日保藏至中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No.1.18401。

2.一種貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)SN-1發酵生產胞外多糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將權利要求1所述的貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)SN-1接種于含糖的LB液體培養基中培養一段時間，得到發酵液；

(2)將發酵液進行離心，去除菌體，取上清；

(3)將離心去除菌體后的上清采用乙醇沉淀法沉淀、靜置，離心，取沉淀，沉淀物溶于水后，采用savage法去除蛋白質，透析后得粗多糖水溶液；

(4)將粗多糖水溶液進行純化，得到純胞外多糖。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中LB液體培養基中含糖量為2-5wt％；所述的糖包括蔗糖、葡萄糖或麥芽糖。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中貝萊斯芽孢桿菌(Bacillusvelezensis)SN-1接種量為5-10％(v/v)。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述含糖的LB液體培養基的pH值為6-8，培養條件為：溫度為25-37℃，搖床轉速100-200rpm條件下，培養48-72h。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(2)所述離心溫度為4-30℃，離心轉速為10000-12000rpm，離心時間為15-20min。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述乙醇的體積百分比濃度為95-100％，所述乙醇沉淀法中乙醇體積是上清液體積的3-5倍；靜置的溫度為4-8℃，靜置時間為12-24h；離心的條件為：4-8℃，10000-12000rpm離心20-40min。

8.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述透析的截留分子量為14000Da，透析的條件為：4-8℃蒸餾水透析2-3d，每5-8h換一次蒸餾水。

9.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(4)所述的純化為采用凝膠過濾層析法對粗多糖進行純化。

10.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述胞外多糖為由α-(1→4)糖苷鍵連接的直鏈甘露糖。