[發(fā)明專利]白蟻SelT基因及其dsRNA結(jié)合金龜子綠僵菌在白蟻防治中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010632198.0
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111748533B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃求應(yīng);趙星穎;劉龍
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/10;A01N63/30;A01P7/04
• 代理公司: 宜昌市三峽專利事務(wù)所 42103
• 代理人: 成鋼

本發(fā)明公開了一種黑胸散白蟻SelT基因dsRNA結(jié)合金龜子綠僵菌在白蟻防治中的應(yīng)用。所述的黑胸散白蟻SelT基因的核苷酸序列為SEQ ID NO:1；基于SEQ ID NO:1，設(shè)計引物擴增PCR獲得SelT基因片段SEQ ID NO:6，根據(jù)擴增片段SEQ ID NO:6設(shè)計含T7啟動子的引物合成相應(yīng)的dsRNA。將合成的特異性dsRNA注射入白蟻體內(nèi)；注射dsRNA的無菌白蟻主動接觸直接感染綠僵菌的未注射白蟻，獲得少量綠僵菌孢子成為受菌同伴白蟻；受菌同伴白蟻的抗菌活性和存活率顯著下降，表明受菌同伴白蟻的主動免疫被打破，注射dsSelT顯著提高了綠僵菌對白蟻的防治效果。本發(fā)明獲得的SelT基因可作為白蟻防治的分子靶標(biāo)，與金龜子綠僵菌結(jié)合使用，有效提高白蟻防治效果，具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種黑胸散白蟻SelT基因及其dsRNA結(jié)合金龜子綠僵菌在白蟻防治中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

SelT是主要定位于細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的硫氧還蛋白樣酶，不僅涉及內(nèi)分泌胰腺的結(jié)構(gòu)完整性，而且參與血糖穩(wěn)態(tài)，并發(fā)揮調(diào)節(jié)Ca²⁺穩(wěn)態(tài)和氧化還原穩(wěn)態(tài)等多種功能。沉默SelT基因有助于病原菌對秀麗隱桿線蟲的侵染，影響線蟲對傷害性刺激的反應(yīng)。因此，SelT可能是降低宿主免疫力的有效靶標(biāo)基因。

社會性昆蟲白蟻已有2.5億年的生活史，因其分布范圍廣、適應(yīng)力強，具有構(gòu)筑地下巢穴、取食木材和纖維制品等習(xí)性，不僅對人們的日常生活帶來了嚴重困擾，也給國民經(jīng)濟造成了重大損失。目前，噴施化學(xué)農(nóng)藥和使用毒餌誘殺是防治白蟻的主要手段，但隨之而來的環(huán)境污染等問題不容忽視。近年來，隨著科研人員對白蟻致病菌的深入研究，開發(fā)和利用致病菌防治白蟻具有廣闊的應(yīng)用前景。

金龜子綠僵菌是應(yīng)用最為廣泛的真菌殺蟲劑之一，可制備成原粉劑、粉劑、可濕性粉劑、乳劑等劑型用于防治害蟲。室內(nèi)試驗表明，用1×10⁸孢子/mL濃度的金龜子綠僵菌孢子懸浮液處理白蟻后，第5 d出現(xiàn)死亡，18 d后死亡率100%（見《湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)》，2006，45(1)：62-64）。但是野外試驗表明，群體生活的白蟻能夠通過理毛、隔離和埋尸等一系列的衛(wèi)生行為和生理免疫機制來干擾和抑制綠僵菌的侵染過程（見《Journal of EconomicEntomology》，2008，101(3)：885-893），這大大降低了綠僵菌對白蟻的防治效果。正是因為白蟻群體進化出多種社會免疫策略（如主動免疫：健康個體通過接觸染菌個體獲得亞致死劑量的分生孢子，激活自身免疫系統(tǒng)提高免疫力），導(dǎo)致單一的綠僵菌生物制劑對野外白蟻的防治效果不理想。因此，打破和瓦解白蟻群體抵御綠僵菌侵染的社會免疫策略是提高綠僵菌防治白蟻效果的關(guān)鍵所在。鑒于此，本發(fā)明提供了一種黑胸散白蟻SelT基因及其dsRNA結(jié)合金龜子綠僵菌來防治白蟻，相比于單純使用綠僵菌生物制劑，本發(fā)明可以瓦解白蟻群體的社會免疫，顯著提高綠僵菌對白蟻的防治效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能夠瓦解白蟻巢群免疫防御機制的靶標(biāo)基因SelT及其dsRNA，并結(jié)合金龜子綠僵菌來防治白蟻。