[發明專利]耐鹽地衣芽孢桿菌A-A2-10的培養方法及應用

有效

• 申請號: 202010631595.6
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN111662848B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 趙晨;趙林;岳秋林;李昆侖;李寶君;蘇樂
• 申請（專利權）人: 濟南航晨生物科技有限公司;齊魯工業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C05F11/00;C01C1/24;C05F15/00;C05F11/08;C05F17/20;C02F3/34;C12R1/10;C02F101/38;C02F103/32
• 代理公司: 北京智橋聯合知識產權代理事務所(普通合伙) 11560
• 代理人: 江莉莉

1.耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10的培養方法，其特征在于，所述的耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10菌株已于2020年3月6日保藏于中國典型微生物保藏中心，保藏編號CCTCC NO. M 2020051；

所述方法的步驟是：將地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10接種于種子培養基中，在37～42℃下培養12～18h；然后按照4～6%的接種量接入發酵培養基中，在37～42℃下培養96～120h，獲得含有γ-聚谷氨酸的發酵液。

2.如權利要求1所述的耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10的培養方法，其特征在于，所述耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis的種子培養基由以下重量百分比的原料組成：酵母粉0.35～0.65%，蛋白胨0.8～1.2%，氯化鈉0.35～0.65%。

3.如權利要求1所述的耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10的培養方法，其特征在于，所述耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis的發酵培養基由以下重量百分比的原料組成：含有質量濃度為12～20%硫酸銨的谷氨酸廢液，余量為無菌水，采用1M NaOH調節pH值為7.0～7.5。

4.如權利要求1所述的耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10的培養方法，其特征在于，所述耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10在牛肉膏蛋白胨培養基中，于37℃下培養24h后，培養基中呈現白色不透明的單菌落，表面濕潤有光澤，邊緣為圓鋸齒，直徑4-5mm；革蘭氏染色陽性G+,細胞為桿狀，芽孢染色后呈橢圓形；接觸酶陽性，V.P.反應陽性，硝酸鹽還原陽性，D-葡萄糖發酵陽性，D-木糖發酵陽性，阿拉伯糖發酵陽性，甘露醇發酵陽性，淀粉水解陽性。

5.耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis制作為菌劑的方法，其步驟如下：

（1）將低溫保存的Bacillus licheniformis A-A2-10菌株在LB固體培養基上活化，挑取單菌落在LB斜面培養基上37℃培養24小時，獲得活化的菌種；

（2）用無菌的接種環從LB斜面上刮取一環活化的菌種，接種于50mL LB液體培養基180rpm，37℃振蕩24h，收集菌體，并調整菌體濃度為10⁸cfu/mL，獲得種子液；

（3）發酵培養按體積比1.5％將步驟(2)得到的種子液接種于發酵培養基，于37℃，180r/min搖培96 h；搖培得到的發酵液離心后，菌體用無菌水洗滌兩次，離心，刮取沉淀的菌體置于無菌水中，配制得到只含菌體的菌劑；

所述的耐鹽地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis A-A2-10菌株已于2020年3月6日保藏于中國典型微生物保藏中心，保藏編號CCTCC NO. M 2020051。